2×Long Taq Premix

概述
   本产品是以Long Taq DNA聚合酶和反应缓冲液为基础，经过优化形成的两倍浓度的PCR预混液。该产品具有快速简便、灵敏度高、特异性强、产量高、稳定性好等优点，可用于常规片段、长片段DNA扩增和GC含量高及具有复杂二级结构的片段扩增。本产品使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取0.5倍的2×Long Taq Premix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积。本产品含溴酚蓝染料，使用前请保证充分溶解并混匀，所有操作需在冰上进行。
应用
 长达30kb的简单模板DNA片段扩增；
 人基因组模板GC含量高达70%的DNA片段扩增；
 人基因组长达15kb的DNA片段扩增；
 PCR产物用于TA克隆。
贮存条件
   -20℃贮存。
质量控制
   经检测无外源核酸酶活性，PCR方法检测无宿主DNA残留，能有效扩增人类基因组基因；室温存放一周或者4℃存放一个月，活性改变小于1%。
注意事项
    1. 大于10kb长片段，引物退火温度一般设计在 65℃-70℃，此时可使用68℃退火和延伸2 阶段扩增法。当然如果设计的引物退火温度小于65℃，则还是使用传统 3 阶段扩增法为好。
    2. 扩增长片段时，PCR扩增时尽可能缩短变性时间。步变性在94℃下进行3 min（简单模板可缩短至2min，GC 含量高可延长至 5 min）。长片段在循环过程中尽可能缩短变性时间（94℃下进行 10-20 秒），除非模板中富含 GC，则 94℃下变性 30 秒。变性需要的时间在不同的 PCR 仪器上以及PCR管中稍有不同。大于10kb的片段扩增，延伸温度尽可能设置为68℃。
    3. 某些情况下为保证反应的特异性，需减少DNA模板量，过多的DNA可能会出现涂抹带甚至无特异性条带。循环数一般为25~35，低拷贝模板可适当增加循环数。过多的循环数不一定会提高PCR产量，相反可能会出现涂抹带，甚至增加非特异性扩增，减少特异性产物。
    4. PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异，在具体操作中需要根据模板类型、目的片段大小、扩增片段的碱基序列和引物的GC含量及长短等具体情况来设计的反应条件，包括退火温度，延伸时间等。