T4 Polynucleotide Kinase

概述
   T4 Polynucleotide Kinase，简称T4 PNK，该酶能催化磷酸基团在ATP的γ-位和单链或双链DNA、RNA或3′-单磷酸核苷的5'羟基进行转移和交换。该酶也是一种3′-磷酸酶，能够水解脱氧3′-单磷酸核苷或脱氧3′-二磷酸核苷中的3′-磷酸基团。
应用
 寡核苷酸的5′末端的磷酸化，以进行后续的连接反应。
 DNA或RNA探针的标记，以用于DNA测序等。
 PCR引物的磷酸化。
 切除3′-磷酸基团。
来源
   由含T4 Polynucleotide Kinase基因的大肠杆菌菌株进行表达。
活性单位定义
   在37℃条件下，30min内将1nmol ATP分子中的γ-磷酸基团转移到5′-羟基DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
10×T4 PNK Buffer
   700 mM Tris-HCl（pH 7.6@25℃），100 mM MgCl2，50mM DTT，反应时需要加入ATP（不随酶提供）。
热失活
   65℃加热20min即可失活。
质量控制
   考马斯蓝染色SDS-PAGE检测纯度大于90%，无核酸内切酶、外切酶及RNase污染。