PriCells: 正常小鼠前脂肪细胞的培养_详细资料

产品信息

服务名称：正常小鼠前脂肪细胞的培养提供商： PriCells 规格： 1000 SLIDES

PriCells: 正常小鼠前脂肪细胞的培养

实验材料：
1. 细胞来源：8—12天龄的小鼠；
2. 清洗液：不含Ca ²⁺和Mg ²⁺的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.4；
3. 消化液：0.3%胶原酶溶液，含4%牛血清白蛋白。用Hanks液配制；
4. DW培养液：DMEM和WAJC404培养液按1：1（V/V）混合，添加100IU/ml青霉素、50μg/ml链霉素；
5. 培养液a：DW培养液，10%胎牛血清；
6. 培养液b：DW培养液，补充胰岛素10μg/ml、转铁蛋白10μg/ml、成纤维细胞生长因子（FGF）10ng/ml和高密度脂蛋白（HDL）溶液5μl/ml；
7. 高密度脂蛋白（HDL）溶液：含蛋白质18mg/ml和胆固醇10mg/ml；
8. 地塞米松：工作浓度为10 ^-7mol/L；
9. 筛网：孔径分别为250μm与80μm的尼龙网筛；

实验方法：
1. 取材；
1）取8—12天龄的小鼠，窒息处死后，置于冰块上；
2）在无菌条件下迅速切取腹股沟的脂肪垫，放入PBS液中；
3）清除脂肪垫中的大血管和结缔组织，洗净血污。称取脂肪垫的重量；
2. 分离细胞；
1）将脂肪垫剪成1mm ³左右的小块，转入50ml锥形离心管中；
2）每0.1g组织块加入3—4ml消化液。在37℃水浴摇床上以60r/min的转速轻微振荡，消化1h。其间每隔10min取出离心管，摇动，使组织块与消化液充分混匀；
3）消化完后，用吸管反复吹打消化液，分散组织块，制成细胞悬液；
4）用孔径为250μm的尼龙网筛过滤细胞悬液，除去未分散的组织块，收集滤液。将滤过液再用孔径为80μm的尼龙网筛过滤，除去大部分成熟脂肪细胞，收集滤液；
5）将得到的滤液离心（700g，7—10min）。吸弃漂浮的脂肪细胞和消化液；
6）用培养液a清洗细胞，离心（700g，7min）。将细胞团制成悬液，再离心。，将细胞沉淀用培养液a重新制成细胞悬液；
3. 原代培养；
1）用培养液a调节细胞密度。将细胞以1.5×10 ⁴个/cm ²的密度接种于培养板中；
2） 24h后，用DW培养液彻底清洗细胞，除去培养物中残留的胎牛血清和未贴壁的细胞（主要为红细胞）；
3）换入培养液b，在37℃、5%CO ₂培养箱中培养。以后用培养液b维持培养。每3d换液一次；
4）在细胞汇合成片后，继续培养；或于细胞汇合成片后第五天，在培养液b中加入10 ^-7mol/L地塞米松，继续培养；
5）培养至出现漂浮细胞时，即可收货细胞，进行鉴定；

PriCells提供：
1. 各种原代细胞特制基础培养基；
2. 各种原代细胞培养特制添加剂；
3. 原代细胞分离试剂盒；
4. 原代细胞鉴定试剂盒；
5. 原代细胞总蛋白质抽提物；
6. 原代细胞总RNA；
7. 原代细胞总DNA；
PriCells: 正常小鼠前脂肪细胞的培养
技术支持 | 浏览次数：83 | 时间：2010-8-5
PriCells: 正常小鼠前脂肪细胞的培养

实验材料：
1. 细胞来源：8—12天龄的小鼠；
2. 清洗液：不含Ca ²⁺和Mg ²⁺的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.4；
3. 消化液：0.3%胶原酶溶液，含4%牛血清白蛋白。用Hanks液配制；
4. DW培养液：DMEM和WAJC404培养液按1：1（V/V）混合，添加100IU/ml青霉素、50μg/ml链霉素；
5. 培养液a：DW培养液，10%胎牛血清；
6. 培养液b：DW培养液，补充胰岛素10μg/ml、转铁蛋白10μg/ml、成纤维细胞生长因子（FGF）10ng/ml和高密度脂蛋白（HDL）溶液5μl/ml；
7. 高密度脂蛋白（HDL）溶液：含蛋白质18mg/ml和胆固醇10mg/ml；
8. 地塞米松：工作浓度为10 ^-7mol/L；
9. 筛网：孔径分别为250μm与80μm的尼龙网筛；

实验方法：
1. 取材；
1）取8—12天龄的小鼠，窒息处死后，置于冰块上；
2）在无菌条件下迅速切取腹股沟的脂肪垫，放入PBS液中；
3）清除脂肪垫中的大血管和结缔组织，洗净血污。称取脂肪垫的重量；
2. 分离细胞；
1）将脂肪垫剪成1mm ³左右的小块，转入50ml锥形离心管中；
2）每0.1g组织块加入3—4ml消化液。在37℃水浴摇床上以60r/min的转速轻微振荡，消化1h。其间每隔10min取出离心管，摇动，使组织块与消化液充分混匀；
3）消化完后，用吸管反复吹打消化液，分散组织块，制成细胞悬液；
4）用孔径为250μm的尼龙网筛过滤细胞悬液，除去未分散的组织块，收集滤液。将滤过液再用孔径为80μm的尼龙网筛过滤，除去大部分成熟脂肪细胞，收集滤液；
5）将得到的滤液离心（700g，7—10min）。吸弃漂浮的脂肪细胞和消化液；
6）用培养液a清洗细胞，离心（700g，7min）。将细胞团制成悬液，再离心。，将细胞沉淀用培养液a重新制成细胞悬液；
3. 原代培养；
1）用培养液a调节细胞密度。将细胞以1.5×10 ⁴个/cm ²的密度接种于培养板中；
2） 24h后，用DW培养液彻底清洗细胞，除去培养物中残留的胎牛血清和未贴壁的细胞（主要为红细胞）；
3）换入培养液b，在37℃、5%CO ₂培养箱中培养。以后用培养液b维持培养。每3d换液一次；
4）在细胞汇合成片后，继续培养；或于细胞汇合成片后第五天，在培养液b中加入10 ^-7mol/L地塞米松，继续培养；
5）培养至出现漂浮细胞时，即可收货细胞，进行鉴定；

PriCells提供：
1. 各种原代细胞特制基础培养基；
2. 各种原代细胞培养特制添加剂；
3. 原代细胞分离试剂盒；
4. 原代细胞鉴定试剂盒；
5. 原代细胞总蛋白质抽提物；
6. 原代细胞总RNA；
7. 原代细胞总DNA；

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