细胞凋亡原位检测试剂盒 TUNEL kit Apoptosis Detection kit FITC labelled Annexen-5

细胞凋亡原位检测试剂盒

UNEL  kit  Apoptosis Detection kit FITC labelled Annexen-5

产品说明
    凋亡是许多正常的生理过程所必需的，包括免疫系统的成熟和作用机制、组织器官和肢体的发生、神经系统的发生等过程。在许多病理条件下，凋亡机制的调节失衡起很重要的作用，包括组织细胞的缺血、缺氧、出血、中风、心脏病、癌症、艾滋病、自身免疫缺损和神经系统的退行性变等。在癌基因的研究方面，由于细胞凋亡可由药物、放射及高热等启动，并且肿瘤细胞具有由于一些癌基因表达即能启动凋亡的内在特性，因此细胞凋亡已引起人们的广泛重视。
    检测凋亡细胞的方法有数种。细胞凋亡过程中核酸内切酶的活化是关键的过程，导致核DNA被裂解成寡核苷酸大小的片段。因此，这个过程被用于检测凋亡，在琼脂糖凝胶电泳上出现典型的“DNA梯形带”。但是，这种方法既不能检测单个细胞水平的凋亡，又不能提供细胞发生凋亡所处的组织位置和细胞分化状态等方面的信息。    这一切可以由凋亡的原位酶标记方法来完成。DNA聚合酶和末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT）用来标记DNA链断端的核酸，应用TdT进行的末端反应又称为ISEL或TUNEL技术，它与应用DNA聚合酶的ISNT（in situ nick     tranlation）相比具有以下优点：灵敏度高、快速、优先标记发生凋亡的细胞，而不是坏死的细胞。

     本试剂盒检测细胞凋亡分以下三个步骤： 
    1、标记DNA链断端，由TdT催化，以FITC标记的核苷酸为原料，进行非模板依赖方式的3?OH端DNA末端聚合反应；
    2、用HRP或AP标记的羊抗FITC的抗体（Fab段）与聚合到DNA末端的FITC结合；
    3、用酶的底物显色，HRP常用DAB显色，AP常用BCIP/NBT显色

TUNEL细胞凋亡试剂盒内容：

试剂1： 酶浓缩溶液（Enzyme Solution）

试剂2： 标记溶液（Lable Solution）

试剂3： 转化剂-POD（Converter-POD）

酶标记抗荧光素抗体（即用型）  

试验所需其它试剂：

非石蜡切片 ·冲洗缓冲液:磷酸盐缓冲液（PBS）

·阻断溶液:0.3%H2O2甲醇溶液

·固定溶液:4%多聚甲醛（溶剂pH7.4新鲜配制的PBS溶液）

·渗透液:0.1%Triton甔-100（溶于新鲜配制的0.1%枸橼酸钠溶

液）

石蜡切片 ·二甲苯和乙醇（、95%、90%、80%、70%用蒸馏水稀

释）

·冲洗缓冲液:磷酸盐缓冲液（PBS）

·蛋白酶K 工作液10~20mg/ml溶于10mM Tris/HCl（pH7.4~7.8）

根据需要选择:

·渗透液:0.1%TritonX-100（溶于新鲜配制的0.1%枸橼酸钠溶

液）

·胃酶溶液（0.25%-0.5%溶于HCl ，pH2）或胰酶

·0.1M枸橼酸缓冲液，pH6，微波修复