超级杂交液(原位杂交)说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

超级杂交液(原位杂交)说明书由老Pai试剂供应北京百奥莱博供货并提供技术支持，本产品用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多超级杂交液(原位杂交)等探针标记及检测产品请联系我司咨询订购。

名称：超级杂交液(原位杂交)说明书
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：10mL
英文名：Super hybrid solution(In situ hybridization)
本产品为我司开发的即用型原位杂交专用核酸杂交液。既可以用于RNA原位杂交、DNA原位杂交，也可以用于FISH原位杂交等试验。

原位杂交是在一定生物结构基础之上的核酸杂交。这种结构基础可以是一条染色体；一个细菌；更大结构基础是细胞和组织。基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，通过*键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA 双键分子，应用带有标记的(有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高*(代"辛")等非放射性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针，与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交，然后可用放射自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在并定位；用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

使用方法：(以检测mRNA序列为例)

培养细胞和冰冻切片
1. 玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为DμLbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4. 30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5. 暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片加20μL预杂交液(提前加入鲑鱼精DNA，终浓度为100μg/ml)。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
 注：靶DNA的变性，DNA-DNA杂交检测中，在杂交前需要增加靶DNA的变性步骤(对mRNA的原位杂交无需此步)。样品DNA的变性可能会造成样品形态学的部分破坏，此步是实验中需要优化的一个步骤。实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得条件。可以将探针的变性和样品DNA变性同步进行：将样品和探针溶液加盖盖玻片，置于烘箱80℃变性 ，处理5-10 min，后冷却至37℃进行杂交。
8.杂交——按每张切片20μL杂交液(探针浓度约为1ng/μL；杂交液提前加入鲑鱼精DNA，终浓度为100μg/ml)，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃ 0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃ 0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃ 30分钟。甩去多余液体，不洗。
11. 根据探针标记物，选择相应显色方法显色、复染，脱水、封片。
12. 结果观察。

石蜡切片
 如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
5.其余步骤和冰冻切片6-11步相同。
6. 结果观察。

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·柱式软体动物DNA提取试剂盒
编号：BTN101111
英文名称：Mollusc DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是专门用于从各种软体动物组织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于阳离子去垢剂CTAB在适当的离子强度条件下，特异地跟基因组DNA 结合形成沉淀，然后在用硅胶膜技术进行进一步纯化。

产品特点：
1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物动物，包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。
2. 提取到的基因组DNA 完整性，其中Z长可以到达长度一般在20-50kb。
3. DNA 纯净，OD260/280一般都在1.9左右、DNA片段大小在30-50 Kb左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。
4. 操作简单，整个过程约30分钟。
5. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
6. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
RNase A(10mg/mL)	150μl
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1. 匀浆方法一：称取0.1-0.3g软体动物组织，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：Z好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA 会吸附在表面，影响得率。在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。进入第三步。
2. 匀浆方法二：将0.1-0.3g软体动物组织剪成小块，转移到10-15mL塑料管中(培养细菌那种离心管即可)，加入1mL 65℃预热的溶液A，用Polytron 式匀浆机(剪切式匀浆机)匀浆1分钟左右。
3. 65℃保温5-30分钟，其间Z好吹打混匀2-3次。
4.转移到新的1.5mL离心管中，12000～15000g室温离心3分钟。
5. 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状。
7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
9. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
10. 12000～15000g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新1.5-5mL塑料离心管中。注意：由于下一步要加1.5倍体积的溶液C，所以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀，然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12. 每次转移0.7-0.8mL 混合液后，室温放置5-10分钟。
13. 12000～15000g室温1分钟，弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品，可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中，重复第12-14 步的操作。
15. 将0.7mL 通用洗柱液加入离心柱，室温离心1分钟，弃穿透液。
16.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液，12000～15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
17. 空甩1分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL DNA 洗脱液2.0。
19.室温放置5分钟后离心1分钟，管底即为软体动物DNA溶液，可立即使用，也可长期保存在－20℃。
20.可以重复上步一次，以洗脱更多的DNA(第二次洗脱的DNA一般有次的30%左右)。


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·**酚溶液
编号：BTN131112
英文名称：Chloronaphthol(4CN) Solution
规格：250mL
**酚分子式C10H7OCl，分子量为178.6，可用于印迹或组织化学实验中辣根过氧化物酶的显色检测。这种沉淀物不如TMB和DAB灵敏和稳定，但是这种可溶于酒精的沉淀物很易拍照，并且由于其为独特的蓝紫色，经常被用于双染。

产品特点：
1. 稳定，预过滤，即用型溶液；
2. 无需过氧化*；
3. 易于拍照。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期一年。

·抗凝血酶Ⅲ(10mg/mL)
编号：BTN130534
英文名称：Antithrombin III Solution
规格：1mL
本产品为抗凝血酶Ⅲ水溶液，浓度为10mg/mL,pH=7.0-9.0。工作浓度为1 Inh.U/mL。抗凝血酶Ⅲ(抗纤维蛋白酶Ⅲ，ATⅢ，antithrombin Ⅲ)是一种维生素K依赖的单链糖蛋白，分子量是65000。属丝*酸蛋白酶YZ剂，可以YZ血液凝固过程中的所有丝*酸蛋白酶(凝血酶及因子Ⅻα、Ⅺα、Ⅸα等等)的活性，也可以YZ胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶等。

活力单位定义：一个YZ单位Inh.U是指，在肝素存在下，ATⅢ灭活一个单位的25℃，pH8.1的凝血酶。

储存条件：低温运输，4℃一周内稳定。

·非酶DNA清除剂-2(＜200nt)
编号：BTN70801
英文名称：Non-enzymatic DNA Scavenger
规格：15次
用Trizol等方法提取的总RNA样品中经常会含有基因组DNA污染，这些污染会影响下游的RT-PCR和Northern杂交等实验。目前Z常用的RNase-free DNase处理方法因DNase中所含残留的RNase能破坏RNA完整性而具有很大缺陷。百奥莱博开发的非酶DNA清除剂-2不但彻底避免了RNase-free DNase的这一缺陷，同时还具有操作快速，稳定性好和性价比高等诸多优点，完全可以替代价格昂贵的RNase-free DNase。

产品特点：
1.GX，能使总RNA中的基因组DNA污染降上百倍(根据PCR检测)而RNA分子完整性不会受到任何影响。
2. 本身不含RNase污染，因为本产品为非酶产品；而在制备RNase-free DNase时，为避免DNase失活，处理条件往往比较温和，所以终产品中往往残留有RNase污染。
3.快速，只需要十多分钟。
4. 稳定，本产品为非酶产品，可以常温运输和4℃长期保存；而RNase-free DNase的运输和长期保存必须在低温进行。
5. 性价比高，单位成本远低于RNase-free DNase。
6. 能用于小RNA中DNA污染的去除。

储存条件：常温运输、4℃保存,有效期一年。

使用方法：
1. 将总RNA溶液与溶液A按1：1的比例混合(即100μl RNA溶液需加100μL DNA Scavenger-2)，充分震荡半分钟。注意：RNA溶液中盐(如*离子)的浓度不能高于0.2 M，如果RNA溶液的量不足100μL，Z好加无RNase水补足到100μL以便后续操作，如果体积大于100μL，试剂的用量也需要按比例增加。
2. 加入相当于RNA溶液和DNA Scavenger-2 混合液总体积1/2的自备*仿，充分震荡半分钟。
3. 12000～15000g室温或4℃离心1-3分钟。
4.转移上清到一个RNase-free的塑料离心管中，加2倍体积的溶液B(用前摇匀)，充分震荡半分钟。
5. 12000～15000g室温或4℃离心10分钟后，小心弃上清。如果处理的样品中含有小RNA，Z好使用30分钟的离心时间。
6. 加1mL自备75%乙醇，充分震荡半分钟。
7. 12000～15000g室温或4℃离心5分钟后小心弃上清。
8. 短暂快速离心，小心吸弃余液。
9. 加入自备RNase-free 水溶解RNA沉淀后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
Q：能否用本产品对同一样品进行反复处理？
A：可以。
Q：为何处理后的RNA还有DNA 条带？
A：有些时候(尤其是使用非变性电泳检测时)RNA 会形成聚合物，电泳很慢，人们会误以为是DNA，可以加少量无DNase的RNase处理样品，确认就是DNA。如果是，可能是样品中盐浓度过高使DNA 去除效率降低，可以预先用乙醇沉淀法去掉盐离子。
Q：本产品跟DNA Scavenger(BTN60201)有何区别？
A：前者可以用于小RNA(长度小于200nt)的RNA样品而后者不能。



超级杂交液(原位杂交)说明书关键词：原位杂交,Super hybrid solution(In situ hybridization),BTN130906,超级杂交液(原位杂交)

BTN91101 一管式TMB显色液 One-Tube TMB Chromogenic Solution
分子筛13X型 Mepiquat chloride 63231-69-6
1-*磷酸*盐 Clearing factor lipase 2183-17-7
正磷*(代"酸")铁四水物 DL-Cystine 31096-47-6
002002 无菌脱纤维兔血
D-酪*酸甲酯盐*(代"酸")盐 EAH Sepharose 4B 3728-20-9
BTN100840 嘌呤霉素干粉 Puromycin Powder
聚氧乙*(代"烯")月桂醇醚 MUG 6540-99-4
9008-02-0 牛血红蛋白 Hemoglobin
吩嗪乙基硫*(代"酸")盐 3,5-Dihydroxytoluene 10510-77-7
2′-脱氧腺苷-5′-三磷酸二*盐 Penicillin&Streptomycin&Neomycin solution,γ-Irradiated 74299-50-6
BTN130702 p19 siRNA结合蛋白 p19 siRNA Binding Protein
ARB10837 人抗表皮细胞基底膜抗体(EBMZ)ELISA代测服务 Human epidermal basement membrane zone,ebmz ELISA KIT
癸烷磺酸* Ammonium phosphate tribasic 13419-61-9
ARB12812 小鼠乙型肝炎表面抗体(HBsAb)含量测试 Mouse hepatitis b virus surface antibody,hbsab ELISA KIT
3,5-二碘-L-酪*酸 Diphenylcarbazone 300-39-0或18835-59-1
丙二酸* Bathophenanthroline 141-95-7
ARB11273 人骨退化特异标志物(CTX-2)血清中含量检测 Human ctx-2 ELISA KIT

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