项目说明:中和抗体定制属于抗独特型抗体定制服务中的其中一项,抗独特型抗体定制又分为单克隆抗独特型抗体和多克隆抗独特型抗体定制。
每一种特异性抗体可变区所具有的抗原特异性,被称为抗体独特型(antibody idiotype)。针对抗体可变区的独特型的抗原表位,产生的特异性抗体,称为抗独特型抗体(anti-idiotype antibody; antiidiotypic antibody,AId),也称为抗抗体。
用抗体分子免疫动物,可能会产生若干种抗独特型抗体,其中由抗原结合部位(epitope)的独特型序列产生的抗体,具有中和活性,能够完全阻抑抗原与抗体的结合,与抗原决定簇分子互为“内影像”关系,可模拟抗原结构和功能的作用。这类抗体可以用于抗独特型疫苗研制,具有低毒,易于制备等优点;在抗体药物的药代动力学(PK)研究和抗体药物免疫原性检测方面,也具有重要作用。
武汉戴安生物技术有限公司结合多年的抗体研发经验,向抗体药物开发企业和科研院所推出单克隆抗独特型抗体和多克隆抗独特型抗体制备服务。
由于单克隆抗独特型抗体成分单一,可重复制备,基本无批间差异,已经成为独特型抗体的主流产品。
单克隆抗独特型抗体制备
阶段一:抗原制备
客户或公司制备抗原。若客户提供抗原,全长IgG分子,Fab/ F(ab’)2片段,单链抗体,或根据可变区序列设计的多肽序列,均可做为抗原;同时准备阴性对照抗体,方案双方沟通确定。
阶段二:抗原处理(1-10天)
武汉戴安生物技术有限公司根据不同抗原特性,设计抗原处理方案(例如酶切,偶联,纯化等),提交客户,经客户同意后按照标准流程操作。纯化质检后进入下程。
阶段三:单抗制备(10-150天)
10-65天:持续免疫5只 Balb/c小鼠,间接ELISA测定血清效价,至效价足够高。
标准免疫周期如下:
主注射
第21天 次加强注射
第35天 第二次加强注射
第42天 第三次加强注射
第47天 试取血+ELISA检测(约10ml血清)
第49天 第四次加强注射
第52天 融合
试取血以间接ELISA检测血清效价, 间接竞争ELISA检测血清中和抗体效价;选择间接竞争ELISA效果Z好的小鼠融合。
65-70天:融合小鼠脾细胞与瘤细胞,获得需要的杂交瘤细胞。
70-100天:间接ELISA,间接竞争ELISA筛选阳性杂交瘤细胞并做亚克隆,提供10株阳性细胞上清给客户,供客户筛选。将客户选出的阳性杂交瘤细胞做第二次亚克隆,保证细胞株的纯度和稳定性,如有必要可增加亚克隆次数。
100-120天:对筛选出的阳性杂交瘤的单克隆抗体进行亚型鉴定,扩大培养客户确认的阳性克隆细胞。
120-150天:将扩大培养的阳性杂交瘤细胞制备腹水,并纯化抗体1-2mg。
阶段四:产品交付(150-180天)
150-180天:制备以下产品并发货:5mg纯化的抗独特型抗体,1-3株杂交瘤细胞,检测相关数据。
多克隆抗独特型抗体制备服务
多克隆独特型抗体制备服务的优势在于快速、亲和力强、敏感性高,但存在批间差异。
服务流程如下(该流程为一般流程,如有特殊需求,可协商具体解决方案):
阶段一:抗原制备
一般公司制备抗原,若客户提供抗原,全长IgG分子,Fab/ F(ab’)2片段,单链抗体,或根据可变区序列设计的多肽序列,均可做为抗原;同时准备阴性对照抗体,方案双方沟通确定。
阶段二:抗原处理(1-10天)
武汉戴安生物技术有限公司根据不同抗原特性,设计抗原处理方案(例如酶切,偶联,纯化等),提交客户,经客户同意后按照标准流程操作。纯化质检后进入下程。
阶段三:免疫实验兔或山羊(10-100天)
标准免疫周期如下:
l 主注射
l 第28天 次加强注射
l 第42天 第二次加强注射
l 第49天 试取血+ELISA检测(约10ml血清)
l 第56天 第三次加强注射
l 第70天 第四次加强注射
l 第84天 终放血(40~50ml血清)
检测抗体效价及中和抗体效价。
阶段四:抗体纯化(100-110天)
亲和纯化抗独特型抗体,吸附除去其它抗体, 吸附。
蛋白表达服务:
重组蛋白表达、蛋白质纯化、包涵体复性、天然蛋白提取。
抗体定制服务:
多克隆抗体制备(包括修饰性抗体)、单克隆抗体制备、单克隆抗体对制备、中和抗体制备等。
支持多种属抗体定制:斑马鱼、线虫、果蝇、病毒、拟南芥、蓝藻、棉花、马铃薯等。
武汉戴安生物技术有限公司拥有完善的蛋白质白表达系统,对重组蛋白表达、纯化、包涵体复性、天然蛋白提取等方面拥有完备先进的设备、丰富的经验。
同时公司拥有十多年从事抗体生产的技术人员,对抗体的研发和生产达到行业水平。生产的抗体不仅能够满足科研客户的需要,有少部分抗体达到诊断级应用标准。