绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞,MFC-GFP细胞服务简介
细胞转染即把核酸导入细胞。常规转染技术分为两类:瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平表达,通常可持续几天(1-3天)。稳定转染需要通过一些选择性标记来进行反复筛选得到稳定转染的同源细胞系。目前使用Z广泛的是脂质体介导法,另有很多商品化的转染试剂可供选择。
绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞,MFC-GFP细胞技术方法
转染方法 | 原理 | 应用 | 特点 |
磷酸钙法 | 磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞 | 稳定转染,瞬时转染 | 不适用于原代细胞,转染效率高,对细胞毒性小,但技术要求很高 |
电穿孔法 | 高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA通过膜上形成的小孔导入 | 稳定转染,瞬时转染 | 简单,可重复性高 对绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞,MFC-GFP细胞有毒副作用 转染时需除血清 |
阳离子脂质体法 | 带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞 | 稳定转染,瞬时转染 | 适用性广,转染效率高,重复性好,转染时需除血清。转染效果随细胞类型变化大 |
病毒介导法 | 通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中 | 稳定转染 | 用于难转染的细胞,原代细胞,体内细胞等 |
绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞,MFC-GFP细胞技术步骤 ①将对数生长期的细胞浓度调整为1~10×104细胞/ml,按103~104个细胞接种于96孔板,每孔100 μl;
②培养细胞24小时后,对其进行不同处理,每个处理设三个平行对照;
③(MTT法):适当培养时间后,取出细胞,倒掉培养液,每孔加入5 mg/ml新鲜配制的MTT溶液,温育4小时,再次倒掉上清液,每孔加入200 ml DMSO,摇匀后,酶标仪检测吸光值。
(台盼蓝拒染法):适当培养时间后,收集细胞,经台盼蓝染色,在倒置显微镜下计数蓝染及不染色细胞,计算细胞存活率。
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促品如下:人FK506结合蛋白12雷帕霉素关联蛋白(FRAP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠E1A结合蛋白P300(EP300)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
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人蛋白激酶Bα(PKBα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
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人F-框蛋白32(FBXO32)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
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小鼠CCAAT增强子结合蛋白β(CEBPβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
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人Twist转录因子(TWIST)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人FK506结合蛋白1A(FKBP1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人兴奋性氨基酸转运蛋白2(EAAT2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人蛋白二硫化物异构酶A4(PDIA4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人AN1-型锌指域蛋白6(ZFAND6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
马类胰蛋白酶(TPS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人型胆碱受体β3(CHRNβ3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠静止素Q6硫基氧化酶1(QSOX1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人腺苷A2a受体(ADORA2a)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
人甘露糖磷酸异构酶(MPI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
小鼠趋化因子C-C-基元配体1(CCL1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
大鼠细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)