DNA（羟）甲基化实时定量PCR技术服务_详细资料

产品信息

提供商：上海虹舜生物科技有限公司服务名称： DNA（羟）甲基化实时定量PCR技术服务

    DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用，是目前新的研究热点之一。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法应运而生。其中，MeDIP-chip(MeDIP: Methylated DNA Immunoprecipitation)是目前高通量分析基因组DNA甲基化变化的一种准确可靠的实验技术，运用该技术，可以检测全基因组范围内的甲基化位点；研究启动子甲基化对基因的调控；比较不同组织、细胞、肿瘤等的甲基化图谱以及寻找诊断和预后的分子标志物。

虹舜生物为您提供(h)MeDIP-qPCR技术服务，您只需要提供保存完好的标本及标本信息，虹舜生物就可为您完成全部实验操作，包括超声打断基因 组、甲基化DNA免疫共沉淀、MeDIP与 Input DNA片段线性扩增、图像采集和数据分析,提供给您完整的实验报告。

(h)MeDIP-qPCR服务技术优势:
    ※ 一站式服务：客户只需要提供保存完好的组织或细胞标本，技术服务人员就可为您完成全部实验操作（图1）和数据分析流程，并提供完整的实验报告。
    ※ MeDIP富集效果特异性佳：MeDIP是获得准确测序数据的关键。MeDIP平台经过不断地优化，抗体富集效率高和特异性好。
    ※ 严格的质控体系：虹舜生物在MeDIP-chip每个关键步骤都加入了质控实验。这些QC数据能够评估每个步骤的实验质量。如果达不到标准，我们会重复实验步骤或者优化实验体系，使得每个样品都能够达到质控标准。

*图释： MeDIP-ChIP实验流程和质控体系。



*图释：MeDIP-qPCR 质控。MeDIP特异地富集甲基化的DNA区域（H19启动子区），而非甲基化区域（GAPDH启动子区）几乎无富集。

(h)MeDIP-qPCR技术服务主要实验流程:
1超声打断基因组：
    将基因组DNA超声打断成400bp-500bp DNA片段
2甲基化DNA免疫共沉淀：
    a) 加热变性并将变性后的单链DNA样品分成两份
    b) 其中一份单链DNA样品加入抗5’-甲基化胞嘧啶核苷抗体
    c) 用免疫磁珠法分离b步样品中甲基化DNA片段的抗体复合物，样品中其余的非甲基化DNA片段被清洗掉
    d) 纯化免疫共沉淀的DNA片段（MeDIP）
3实时荧光定量PCR检测
4实验数据处理
● Total input DNA样品作为模板，用待测基因特异性引物进行qPCR，检测得到Ct值(Input)
● Medip DNA样品作为模板，用待测基因特异性引物进行qPCR，检测得到Ct值(MediP)
● 待测基因免疫共沉淀的效率(Medip/ Total input)可通过以下公式计算：
    %(MedIP / Total input) = 2^[ Ct (Input)- Ct (MedIP) ] * 100实验

(h)MeDIP-qPCR样品准备：
悬浮细胞：

约1×10⁷个细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入2－5 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入- 70°C冰箱保存。干冰运输。
贴壁细胞：

约1 × 10⁷个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入2－5 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入- 70°C冰箱保存。干冰运输。
组织：

采集新鲜组织（注意：生物体死亡后10分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入液氮或- 70°C冰箱中保存，干冰运输。

注：
1、所使用的1.5 ml冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌，装好样品后管口需要以封口膜封好。
2、快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。

资料下载：

5 (h)MeDIP-qPCR技术服务.doc 附件下载 (下载 6 次)

请 [登录] 后再下载!

您可能感兴趣的产品

DNA（羟）甲基化实时定量PCR技术服务

产品信息

联系我们

关注我们