北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销售,产品线涵盖链霉亲和素琼脂糖纯化树脂优惠在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:链霉亲和素琼脂糖纯化树脂优惠
英文名:Streptavidin Agarose Resin 6FF
规格:5ml
品Pai:百奥莱博
编号:SY0399
本品是一种生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质的纯化树脂,其作用原理是基于链霉亲和素与生物素之间的相互作用,将链霉亲和素高度交联于6%琼脂糖上,独特的制备工艺使其具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。
由于链霉亲和素与生物之间的亲和力很强,纯化时需要在变性条件下洗脱;而链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱,可以在 pH9.5-11.0 结合,pH4.0 时洗脱,不需要使用变性剂,所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。
基质(Matrix):高度交联的6%琼脂糖微球
配体(Ligand):链霉亲和素
孔径(Bead size):45-165µm
载量(Capacity):>200nmol Biotin/ml介质
压力(PressureMax):0.3 MPa, 3bar
pH稳定范围:2-10
储存缓冲液:20%乙醇
储存条件:4℃,有效期2年
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·逆转录酶
编号:SY0293
英文名称:M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
规格:5000U
本品适用于链cDNA合成,cDNA 片段长度可达12kb。也可用于低拷贝基因的检测。野生型的M-MuLV包含RNase H活性,该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因而在cDNA 条链的合成过程中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA,本品为通过基因重组技术得到的点突变型RNase H活性缺失的逆转录酶,即M-MLV (H-) Reverse Transcriptase,与M-MuLV相比,不仅改善了模板RNA可能被降解情况,且具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。
注意事项
1)为保证反转录成功,建议使用高质量的RNA样品。
2)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。
3)如果RNA模板GC含量丰富或者具有复杂的二级结构,可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀,65℃变性5min,冰上冷却,短暂离心后加入其他成分继续下面的反转录步骤。
4)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
使用方法
1条链cDNA合成(以20μl反应体系为例)
1.1 按照表【1】配制反应体系
RNase free ddH2O | to 20μl |
5×Reaction Buffer | 4 μl |
dNTP Mixture (10 mM each) | 1 μl |
Oligo(dT)18(0.5μg/μl) |
or Random hexamer (0.1μg/μl) |
or GSP(Gene Speicific Primer)(2 μM) | 1 μl |
RNase inhibitor (40 U/μl) | 0.5 μl |
M-MLV (H-) Reverse Transcriptase | 1 μl |
模板RNA | Total RNA: 50ng-5μg mRNA: 5-500ng |
表1 cDNA条链合成反应体系表 |
1.2 轻轻混匀
若使用Oligo(dT)18或基因特异性引物,42℃孵育50min。
若使用Random hexamer,25℃孵育10min,42℃孵育50min。
1.3 65℃加热15min失活M-MLV (H-) Reverse Transcriptase。
2 RT-PCR
建议取1/10~1/5体积(2~4µl)的反转录产物作为PCR模板。
2.1 按照【表2】配制反应体系表
组分
| 体积
| 终浓度
cDNA模板 | 2μl | 依需要调整 |
Forward Primer (10μM) | 1μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 1μl | 0.2 μM each |
10×Taq Buffer(含Mg2+) | 5 μl | 1× |
2.5mM dNTPs | 4μl | 0.2 mM |
Taq DNA Polymerase | 0.5μl | 2.5units |
ddH2O to final volume | 50μl | / |
表2 RT-PCR反应体系表 |
2.2 按下列条件进行PCR反应:

储存条件:-20℃。
链霉亲和素琼脂糖纯化树脂优惠