二氯异香豆素溶液，10mg/mL5mL

二氯异香豆素溶液，10mg/mL5mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
二氯异香豆素溶液，10mg/mL5mL三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。

10219MFC 培养基250g/瓶用于大肠菌群滤膜法检测

10408伊红美蓝琼脂（EMB）250g/瓶用于肠道菌选择性分离

10355伊红美兰琼脂（EMB）250g/瓶含乳糖、蔗糖，用于肠道菌的分离 和培养

10240MEE 肉汤250g/瓶用于肠道菌选择性增菌

10255结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBDA）250g/瓶肠道菌计数琼脂，不含乳糖，用于 肠道致病 菌的选择 性分离 和 计数（SN、ISO）

11604LST-MUG 肉汤1000ml/瓶用于大肠杆菌荧光检测

10210MUGal 肉汤基础2000ml/瓶用于大肠菌群快速检测。每 100ml培养基中添加 1 支 20203

10211Aliz-gal 琼脂1000ml/瓶用于大肠菌群快速检测

10229ZG蓝琼脂250g/瓶用于肠道致病菌的选择性分离

10241哥伦比亚-MUG 琼脂培养基1000ml/瓶用于大肠杆菌荧光检测

102274-甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）培养基2000ml/瓶用于大肠埃希氏菌检验

10239缓冲 MUG 琼脂2000ml/瓶用于滤膜法测定大肠杆菌

10254乳糖肉汤250g/瓶用于大肠菌群测定（USP），也用 于沙门氏菌前增菌（ISO）

10245乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂LMG 250g/瓶用于大肠菌群滤膜法检测

10243胰蛋白胨胆汁琼脂（TBA）250g/瓶用于大肠杆菌滤膜法检测

10228乳糖发酵培养基250g/瓶用于大肠菌群的测定

二氯异香豆素溶液，10mg/mL5mL10216乳糖蛋白胨培养液乳糖250g/瓶用于大肠菌群发酵测定

10222亮绿乳糖胆盐培养液BGLB250g/瓶用于大肠菌群测定

10215VRB-MUG 琼脂VRB-MUG 100g/瓶用于大肠杆菌平板计数

10208Honda 氏产毒肉汤基础250g/瓶用于致泻 大肠埃希 氏菌的 产 毒培 养，每 100ml 添加林可霉素 9mg

10209Elek 氏培养基250g/瓶用于致泻 大肠埃希 氏菌的 毒 素测 定

10256Tergitol-7 琼脂250g/瓶用于大肠菌群的鉴定（NMKL）， 每 500ml 培养基中添加 1 支 20101

10258LES-Endo  琼脂250g/瓶用于大肠菌群滤膜法检测

10259现隐肉汤PA 250g/瓶用于水中大肠菌群计数

10260EEM 培养基250g/瓶用于肠道致病菌的增菌（日本）

10262无盐麦康凯琼脂250g/瓶用于尿液 中变形杆 菌和大 肠 埃希 氏菌的分离

10273麦康凯琼脂（不含结晶紫）250g/瓶用于肠道菌的分离和培养

10403麦康凯琼脂（含结晶紫）250g/瓶用于肠道致病菌的选择性分离

10409麦康凯肉汤250g/瓶用于肠道菌的选择性培养

10220EC-MUG 培养基2000ml/瓶用于大肠埃希氏菌计数

10221MUG 营养琼脂培养基2000ml/瓶大肠埃希氏菌滤膜法计数

10218MMO-MUG 培养基100g/瓶总大肠菌群滤膜法检测计数

10261Endo 培养基250g/瓶用于大肠菌群的检测

10282m-Endo 肉汤250g/瓶用于水中大肠菌群膜过滤法检测

10244麦康凯肌醇阿东醇羧苄青霉素琼脂（MIAC）基础100g/瓶用于克雷 伯氏菌选 择性分 离 ，每100ml 培养基中添加 1 支 10244

10206肠道菌增菌肉汤（EE 肉汤）250g/瓶用于肠道菌的增菌培养

10285溴甲酚紫乳糖琼脂250g/瓶用于分离发酵乳糖的细菌

10293A1 培养基250g/瓶用于水源中大肠菌群的检验

11601改良 EC 肉汤（mEC+n）基础250g/瓶用于 O157 选择性增菌，每 225ml 培养基中添加 1 支 21601，每 100ml 培养基中添加 1 支 21607

11602山梨醇麦康凯琼脂（CT-SMAC 琼脂基础250g/瓶用于 O157 菌选择性分离，每 100ml 培养基中添加 21602 和 21603 各 1 支，组成改良山梨醇麦康凯琼脂

11603麦康凯肉汤基础（CT-MAC 肉汤基础）250g/瓶含结晶紫、中性红，用于 O157 菌 选择性增菌，每 100ml 培养基中添 加 21602 和 21603 各 1 支

11607山梨醇麦康凯半固体培养基250g/瓶用于 O157 菌种保存

10246改良胰蛋白胨大豆肉汤（mTSB）基础250g/瓶用于 O157 菌选择性增菌，每 225ml培养基中添加 1 支 21601

10237结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBGA）250g/瓶含乳糖、葡萄糖。用于阪崎肠杆菌 的分离(SN、USP）

10302四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液基础TTB 250g/瓶用 于 沙 门 氏 菌 选 择 性 增 菌 ， 每100ml 培养基中添加 1 支 20315 和1 支 20316

10305HE 琼脂250g/瓶用于肠道致病菌的选择性分离

10306木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂250g/瓶用于肠道致病菌的选择性分离

10313胆盐硫乳琼脂培养基250g/瓶用于肠道致病菌的选择性分离

10319氯化镁孔雀绿增菌液（MM）250g/瓶用于沙门氏菌选择性增菌

10320亚利桑那菌琼脂（SA）250g/瓶用于亚利桑那菌的分离

10321WS 琼脂250g/瓶用于沙门氏菌选择性分离

10322RVS 肉汤250g/瓶用于沙门氏菌选择性增菌

10323亮绿酚红琼脂250g/瓶用于沙门氏菌选择性分离（GB、ISO、SN）

10325EF-18 琼脂基础250g/瓶用 于 沙 门 氏 菌 滤 膜 法 检 验 ， 每100ml 培养基中添加 1 支 20321

10356改良亮绿琼脂培养基250g/瓶用于沙门氏菌选择性分离

10333MKTTn 肉汤基础250g/瓶用于沙门氏菌选择性增菌（ISO）， 每 100ml 培养基中添加 1 套 20315 和新生霉素 4mg

10334赖氨酸铁琼脂（LIA）250g/瓶用于沙门氏菌赖氨酸脱梭、脱氨及 硫化氢复合生化试验（FDA）

10335改良 MSRV 培养基250g/瓶用于沙门氏菌的选择性分离鉴别， 每  100ml  培养基中需添加  1  支21607

10336BPL 琼脂250g/瓶用于沙门氏菌的选择性分离与鉴 别

10337BPLS 琼脂250g/瓶用于样本中沙门氏菌的选择性分 离

10338改良 BPLS 琼脂250g/瓶用于样本中沙门氏菌的选择性分 离

10339M-肉汤250g/瓶用于干燥食品和种子中沙门氏菌 的增菌和培养

10341煌绿磺胺嘧啶琼脂（BGS 琼脂）250g/瓶含磺胺嘧啶，用于沙门氏菌的选择 性分离

10342SBG 磺胺增菌液250g/瓶含磺胺嘧啶，用于沙门氏菌选择性 增菌

10343XLT4 琼脂250g/瓶用于沙门氏菌等肠道致病菌的选 择性分离

10345DCLS 琼脂250g/瓶用于沙门氏、志贺氏菌分离