土霉素盐酸盐溶液 ,100mg/mL10mL_详细资料

产品信息

土霉素盐酸盐溶液 ,100mg/mL10mL存放时间不能超过该温度下的Z长存放时间，如果要存放在-20℃或-80℃，需先将样品在 4℃放置过夜后再转移到的温度。

土霉素盐酸盐溶液 ,100mg/mL10mL运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
土霉素盐酸盐溶液 ,100mg/mL10mL1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
土霉素盐酸盐溶液 ,100mg/mL10mL产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由大肠杆菌 K12 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
大鼠红细胞生成素(EPO)elisa试剂盒，英文名：EPO ELISA Kit
大鼠横纹肌辅肌动蛋白α(sm Actinin-α)ELISA试剂盒，英文名：sm Actinin-α ELISA Kit
大鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)ELISA试剂盒，英文名：MC Ab ELISA Kit
大鼠核转录因子κBP65(NFκBp65)ELISA试剂盒，英文名：NFκBp65 ELISA Kit
大鼠核转录因子κB(NFκB)ELISA试剂盒，英文名：NFκB ELISA Kit
大鼠核因子κBYZ蛋白α(IKBα)ELISA试剂盒，英文名：IKBα ELISA Kit
大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)ELISA试剂盒，英文名：NF-κB p65 ELISA Kit
大鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)ELISA试剂盒，英文名：NF-κB p65 ELISA Kit
大鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA试剂盒，英文名：RANKL ELISA Kit
大鼠核因子κB(NF-κB)ELISA试剂盒，英文名：NF-κB ELISA Kit
大鼠和肽素(copeptin)ELISA试剂盒，英文名：copeptin ELISA Kit
大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA试剂盒，英文名：Tie-2 ELISA Kit
大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA试剂盒，英文名：Tie-1 ELISA Kit
大鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒，英文名：LPO ELISA Kit
大鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)ELISA试剂盒，英文名：PPAR-γ ELISA Kit
大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体β(PPAR-B/PPARD)ELISA试剂盒，英文名：PPAR-B/PPARD ELISA Kit
大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)ELISA试剂盒，英文名：PPAR-α ELISA Kit
大鼠过氧化氢酶(CAT)ELISA试剂盒，英文名：CAT ELISA Kit
大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)ELISA试剂盒，英文名：C4a ELISA Kit
大鼠果糖胺(FRA)ELISA试剂盒，英文名：FRA ELISA Kit
大鼠胱抑素SN(CST1)ELISA试剂盒，英文名：CST1 ELISA Kit
大鼠胱抑素SA(CST2)ELISA试剂盒，英文名：CST2 ELISA Kit
大鼠胱抑素S(CST4)ELISA试剂盒，英文名：CST4 ELISA Kit
大鼠胱抑素D(CST5)ELISA试剂盒，英文名：CST5 ELISA Kit
大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒，英文名：Casp-9 ELISA Kit
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