TOP10化学感受态细胞北京厂家

名称：TOP10化学感受态细胞北京厂家
编号：SY0011
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：TOP10 Chemically Competent Cell
本品是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本品使用pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg，广泛适用于GX的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

TOP10感受态细胞基因型：F-mcrA △(mrr-hsd RMS-mcr BC) 80lacZ△M15 △lac X74 recA1 ara△139 △(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (Strr) endA1 nupG

储存条件：-80℃
组份：
TOP10感受态细胞 100μl×10
pUC19(0.1 ng/μl) 5μl

注意事项
1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3）为确保转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，化实验可能遇到的风险。

使用方法
1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
【注】：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用，应注意所用的DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
2）向100 μl感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30min。
3）将离心管置于42℃水浴中放置60-90 s，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3min，该过程不要摇动离心管。
4）向离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min（150 rpm）， 目的是促使菌体复苏，抗性基因表达。
5）将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃培养12-16 h。
【注】：涂布菌液多少可根据转化DNA量来调整。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，重新悬浮菌体后将其涂布在一个平板上。剩余菌液可置于4℃保存，一周之内可重新涂板。

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·BL21 (DE3)化学感受态细胞
编号：SY0014
英文名称：BL21 (DE3) Chemically Competent Cell
规格：100μl×10管
本品是在大肠杆菌BL21（DE3）菌株基础上制备的化学转化感受态细胞，是以T7 RNA聚合酶为表达系统的基因的GX表达宿主，其基因型为F-ompT hsdS (rB- mB-) gal dcm (DE3)。经检测，本品无外源质粒DNA残留，转化效率≥107 cfu/μg pUC19 DNA。适合非毒性蛋白重组表达。

组份：
BL21 (DE3)化学感受态细胞 100μl×10
pUC19（0.1 ng/μl） 5μl

注意事项

1）感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用。
2）待转化DNA加入体积不要超过感受态细胞体积的1/10。
3）待转化DNA加入感受态细胞后，请勿用移液枪吹打，轻轻弹匀即可。
4）为确保效率转化，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
5）本品应于-80℃保存，请勿将感受态细胞储存于-20℃或液氮中保存。
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）将感受态细胞从-80℃中取出，置于冰水浴中融化。
2）将待转化DNA加入到100 μl感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
3）42℃水浴，不要晃动，准确热激90s后，立刻置于冰水浴中，静置2-3分钟。
4）向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，37℃水浴锅中静置10分钟。
5）150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
6）2,500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
【注】：也可直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

储存：-80℃。


TOP10化学感受态细胞北京厂家