pUM19-T Vector TA克隆载体 克隆与表达

名称：pUM19-T Vector TA克隆载体 克隆与表达
规格：1μg
品Pai：百奥莱博
编号：SY0295
产地：国产|进口
pUM19-T载体是一种用于PCR产物GX克隆（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。经特殊工艺改造后，使其具有较高的克隆效率：

1）特殊的纯化方式使得超过99% 的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。
2）由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’ 端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。
3）pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。

产品组份：
pUM19-T Vector (50 ng/μl)————20 μl
500 bp control ｉnsert (50 ng/μl)————20 μl

使用说明
1. 将载体置于冰上融化。建议次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。
2. 按下表配制连接反应体系：

ddH2O	To 10 μl
10×Ligase Buffer	1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)	1μl (约0.025 pmol)
插入片段*	0.075 pmol～0.25 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl)	1 μl

注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。
3. 对照反应体系（可选）：

ddH2O	6 μl
10×Ligase Buffer	1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)	1 μl (约0.025 pmol)
500 bp control insert(50 ng/μl)	1 μl (约0.15 pmol)
T4 DNA Ligase (400 U/μl)	1 μl

4. 轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。
5. 转化：
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90s后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10min。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
【注】：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

注意事项
1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 连接使用的PCR 片段3’ 端应带有A 末端；Pfu DNA Polymerase (SY0036)等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。
3) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

附1：pUM19-T 载体结构


储存条件：-20℃。

更多有关pUM19-T Vector TA克隆载体 克隆与表达的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·MTT(噻唑兰)
编号：SY0502
英文名称：MTT
规格：250mg
噻唑兰（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT），也称作溴化噻唑蓝四氮唑，是一种黄色染料，已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法，用来检测细胞的活力，细胞增殖以及细胞毒性分析。检测原理在于：MTT是一种可接受氢离子的化合物染料，带正电荷，具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶，而死细胞不具有此功能。甲臜结晶是不能穿透细胞膜，因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解出来，酶标仪下测定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比，用以评估细胞存活状况。

MTT也可用作免疫组化/细胞化学染色试剂，也可用来检测NAD。MTT被快速还原成甲臜后，能够螯合镍，铜和钴。钴螯合物可参与机体氧化系统。

CAS：298-93-1
分子式：C18H16N5SBr
外观：淡黄色至橙色粉末
分子量：414.3
纯度：≥98%
熔点：187℃
溶解性：溶于水，甲醇
储存条件：4℃
结构式


注意事项
1)溶解甲臜的有机溶剂具有毒性，使用时注意防护。
2)MTT有致癌性，应小心操作；MTT溶液需要无菌，因其对菌很敏感。MTT溶液不可4℃保存超过1周，因其可能发生降解，导致检测结果错误。
3)MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度Z好在0-0.7范围内。
4)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


pUM19-T Vector TA克隆载体 克隆与表达