细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI) 细胞凋亡与增殖

名称：细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI) 细胞凋亡与增殖
编号：SY0472
规格：20 rxn
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
Annexin V-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit）是用EGFP标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被EGFP 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

产品组份：
Annexin V-EGFP———————100 μl
PI Staining Solution————100 μl
1×Binding Buffer——————8 ml

注意事项

1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-EGFP的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞，比如在检测凋亡的同时检测细胞周期，只能选用Annexin V-FITC，而不能选用Annexin V-EGFP，因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育，并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片，可以和Annexin V结合，对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-EGFP和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。

更多有关细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI) 细胞凋亡与增殖的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·碱性磷酸酶标记驴抗小鼠IgG (H+L)
编号：SY0719
英文名称：Alkaline phosphatase AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)
规格：100μl
本品是由碱性磷酸酶（AP）标记的驴抗小鼠IgG（H+L），使用抗原偶联的琼脂糖微珠从驴抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的小鼠IgG分子，也会与其他小鼠免疫球蛋白的轻链结合。本品预先与相近物种包括牛、鸡、山羊、豚鼠、叙利亚仓鼠、马、人、兔和绵羊的血清蛋白经过亲和吸附纯化处理，ELISA和/或固相免疫吸附检测证实它与以上物种几乎无交叉反应，但可能会与其他物种的免疫球蛋白发生交叉反应。本品不会与非免疫球蛋白类的血清蛋白发生交叉反应。

本品适合做多标实验，广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学（ICC），流式细胞术（FC）以及免疫组化（IHC）等。

浓度：0.12mg/ml
缓冲液：0.002M 磷酸钠，0.05 M氯化钠， pH 7.6
稳定剂：3 mg/ml BSA（无IgG，蛋白酶），20% 甘油
防腐剂：0.01% 叠氮化钠
推荐稀释比例：1:1000～10000（ELISA/WB）
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。


细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI) 细胞凋亡与增殖