名称:北京双荧光素酶报告基因检测试剂盒哪里卖
产地:国产|进口
英文名:Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
品Pai:百奥莱博
规格:100T
双萤光素酶报告基因检测试剂盒,是先以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase),后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase),并且在后续加入海肾萤光素酶底物时,同时加入YZ萤火虫荧光素酶催化luciferin 发光的物质,使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性,实现双萤光素酶报告基因检测。萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD 的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin 氧化成oxyluciferin,在luciferin 氧化的过程中,会发出生物萤光(bioluminescence)。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD 的蛋白,在氧气存在的条件下,可以催化coelenterazine 氧化成coelenteramide,在coelenterazine 氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。
注意事项
1.无菌操作。
2.荧光染料操作中注意避光进行。
3.由于温度对酶反应有影响,所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
4.为保证荧光素酶检测试剂的稳定性,可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。
5.萤火虫荧光素酶检测试剂、Renilla 荧光素酶检测试剂Z好现用现配。
6.细胞裂解液及裂解时间可根据细胞量适当增加、延长。
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·MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
编号:KFS322
规格:500T
此试剂盒是用于测定细胞增殖与毒性试验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。该试剂盒单溶液试剂包含一种四唑化合物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,内盐;MTS] 和一个电子耦合试剂( 乙硫吩嗪,PES)。PES 的化学稳定性已得到增强,这使它能与MTS 混合形成一个稳定的溶液。
检测时,只需将少量MTS 溶液直接加到检测板孔德培养基中,孵育1-4 小时,然后酶标仪读取490nm的吸光度值就可,省掉了有机溶剂的溶解步骤,简化了实验过程,实验的灵敏度比其它如MTT, XTT 高。
注意事项
1. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待检测体系中存在较多的还原剂,例如一些抗氧化剂会干扰检测,需设法去除。
2. 如果待测溶液有还原性,测定不含细胞,但含有新型细胞增殖及毒性检测溶液在490 nm 处的空白吸光度。如果该吸光度很小,则可以直接加入此细胞增殖及毒性检测溶液,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的200μl 培养基和10μl 新型细胞增殖及毒性检测溶液进行检测。
3. 用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡,否则会干扰测定。
4. 为保证您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作方法1.96 孔板加入细胞100μL/孔(约1×104),置37℃ 5%CO2 细胞培养箱培养24 小时。2.加入适当浓度的受试化合物。3.将96 孔板在37℃,含5% CO2 空气及湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。4.向各孔中加入10μl 的MTS 细胞增殖及毒性检测溶液。5.37℃下孵育1~4 小时。
6. 酶标仪在490nm 波长处检测每孔的光密度。
结果分析
1. 细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加新型细胞增殖及毒性检测溶液,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加新型细胞增殖及毒性检测溶液,无细胞),各重复孔的OD 值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
2. 求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
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