pMiR-LucTM是一系列基于荧光素酶的报告载体,用于定量测定细胞中的miRNA表达。每种载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、独特的3 ´ UTR miRNA靶位点和SV40终止子序列。靶位点是与特定miRNA完全互补的序列。当miRNA表达时,miRNA与该序列结合,导致荧光素酶基因表达的抑制。因此,荧光素酶的活性代表miRNA的表达的活性。当pMiR-Luc报告载体转染哺乳动物细胞时,可用于检测内源性的miRNA表达和活性或者用于监测miRNAs的上调或下调。
pMiR-LucTM是一系列基于荧光素酶的报告载体,用于定量测定细胞中的miRNA表达。每种载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、独特的3 ' UTR miRNA靶位点和SV40终止子序列。靶位点是与特定miRNA完全互补的序列。当miRNA表达时,miRNA与该序列结合,导致荧光素酶基因表达的YZ。因此,荧光素酶的活性代表miRNA的表达的活性。当pMiR-Luc报告载体转染哺乳动物细胞时,可用于检测内源性的miRNA表达和活性或者用于监测miRNAs的上调或下调。A. 优点:· 功能性检测——是一种功能性的分析方法,用于监测细胞内的miRNA表达· 可定量分析——miRNAs表达和活性通过荧光素酶基因表达的YZ进行监测· 可构建稳定细胞系——载体可用于构建表达报告基因的稳定细胞系B. 原理: MiRNA在荧光素酶RNA下游的3' UTR与靶位点结合,YZ荧光素酶表达,使酶活性下降。通过比较二个样品中的酶的活性,miRNA是上调还是下调可以定量测定。MiRNA报告载体见下表(如需要表中未列出的,可订制)。
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