萤光素酶报告基因检测试剂盒(萤火虫) 细胞生物学试剂

名称：萤光素酶报告基因检测试剂盒(萤火虫) 细胞生物学试剂
品Pai：百奥莱博
编号：YT271
产地：国产|进口
规格：100次|1000次
本试剂盒是一种以萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶活性的试剂盒。

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪或液闪进行测定仪测定。本试剂盒的检测原理参考下图。


萤火虫萤光素酶的检测原理图。
通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、GX地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的发光波长为560nm。

注意事项：
1. 为取得测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
2. 由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
3. 为保证萤光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。经测试，反复冻融三次，对测定结果无明显影响。
4. 样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
5. 为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾萤光素酶的报告基因质粒作为内参，采用百奥莱博的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT273)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶报告基因质粒作为内参，然后采用百奥莱博的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(YT274)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(YT274)的检测。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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