生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法) 探针标记及检测

名称：生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法) 探针标记及检测
品Pai：百奥莱博
规格：10次
产地：国产|进口
编号：YT031
本试剂盒是一种通过随机引物标记反应产生生物素标记DNA探针的试剂盒。本试剂盒标记的生物素DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位杂交等。

在Klenow酶(Klenow fragment,3＇-5＇exo-)催化下，通过随机引物标记反应(random prime labeling)可以把生物素标记的Biotin-11-dUTP掺入到新合成的DNA探针中，这样就可以产生生物素标记的DNA探针。在随机引物标记反应过程中，一些标记好的DNA探针可以被Klenow酶从模板DNA链上驱赶下来。这样在模板量较少的情况下，通过随机引物标记反应，可以产生比模板DNA量更多的生物素标记DNA探针，可多达1-15倍左右。

本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记，包括DNA*(代＇片＇)段、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA*(代＇片＇)段应不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用百奥莱博的生物素3＇末端DNA标记试剂盒(YT030)进行DNA探针标记。

用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng，推荐的模板用量为100ng-1μg。本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA，可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。生物素标记DNA可以使用百奥莱博的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当试剂盒进行检测。本试剂盒可以用于10个标记反应。

试剂盒组分：

Random Primer in Buffer(5X)	105μl
Klenow Fragment	11μl
Biotin-Labeling Mix	50μl
Ultrapure Water	1ml
Biotin-Control DNA(3ng/μl)	50μl
探针标记终止液	100μl

储存条件：-20℃。

使用说明：
1. 在一离心管或PCR管内加入100ng-1μg DNA模板，再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water，至总体积为34μl。(通常100-300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应)
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X)，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
3. 沸水浴加热5分钟，或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃，99℃加热5分钟也完全可以)。
4. 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2-3分钟。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
7. 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量，因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
8. 加入3μl探针标记终止液，混匀，终止标记反应。至此标记反应已经全部完成，标记好的DNA可以-20℃保存。
9. 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
10. 整个探针标记反应的流程参见下表：

100ng-1μgDNA模板	xμl
Ultrapure Water	(34-x)μl
Random Primer in Buffer (5X)	10μl
100℃ 5分钟，立即冰浴冷却
Biotin-Labeling Mix	5μl
Klenow Fragment	1μl
总体积	50μl
37℃孵育过夜
探针标记终止液	3μl
-20℃保存
此时可用于标记效率的检测及Southern、Northern等后续检测

11. 探针标记效率的检测：可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后，使用百奥莱博的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表：

模板DNA量	生物素标记DNA产量
—	孵育1小时	孵育20小时
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1350ng
100ng	350ng	1650ng
300ng	750ng	2200ng
1000ng	1300ng	2600ng
3000ng	1600ng	2600ng

注意：具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关，上表的数值仅供参考。
12. 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb，则生物素标记DNA产物的长度通常为100-1000bp，平均长度约为300bp左右。

更多有关生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法) 探针标记及检测的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·IRS1抗体(胰岛素受体底物1抗体)
编号：YT811
英文名称：anti-IRS1 antibody;Insulin receptor substrate 1 antibody
规格：>20次
本抗体是用重组小鼠IRS1一段多肽(aa431-446)作为抗原制备而成的抗IRS1小鼠单克隆抗体。本抗体如果用于常规的Western检测，至少可以检测20次。

本IRS1抗体识别的是总IRS1(total IRS1)，可以检测内源性的IRS1，未发现和其它亚型如IRS2等有交叉反应。

IRS1(insulin receptor substrate 1)，也称IRS-1，是胰岛素受体(insulin receptor)激酶的主要底物。IRS1含有多个酪氨酸磷酸化位点，这些位点磷酸化后可以结合含有SH2结构域的蛋白，如PI3-K和GRB2等，从而介导胰岛素诱导的代谢和促生长信号。IRS1还含有30多个serine/threonine磷酸化位点。胰岛素刺激可以诱导IRS1的Ser302磷酸化。JNK和IKK可以磷酸化IRS-1的Ser307；AMPK家族的SIK-2可以磷酸化IRS1的Ser789。PKC可以调节IRS1的Ser612位点磷酸化，而IRS1的Ser636/639位点磷酸化受mTOR信号通路调控。PKCτ介导IRS1的Ser1101位点磷酸化。IRS1一方面介导了胰岛素的信号转导，但IRS1过表达或一些丝氨酸磷酸化也会导致胰岛素抵抗(insulin resistance)。

产品组份：
IRS1抗体————40μl
Western一抗稀释液————20ml

抗体参数：
免疫原物种：小鼠
免疫原：重组小鼠IRS1一段多肽(aa431-446)
克隆性：单克隆
宿主：小鼠
用途：WB,IP,IC
交叉反应性：人，小鼠，大鼠，猴，牛, 犬，猪
同种型：IgG2aκ
IRS1分子量：～180kD
推荐稀释比例：WB(1:500),IP(1:50),IC(1:250)

注意事项：
1. 在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

储存条件：-20℃，有效期一年。


生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法) 探针标记及检测