DH5α化学感受态细胞 细胞及免疫学

名称：DH5α化学感受态细胞 细胞及免疫学
产地：国产|进口
编号：RFT112
规格：20×100ul
品Pai：百奥莱博
● 储存条件：-70℃冻存六个月
● 产品简介：
本公司生产的DH5α感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测，转化效率可达108cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
● DH5α菌株介绍：基因型：supE44△lacU169（j80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特点：一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的YZ型菌株。其j80 lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的 b-半乳糖苷酶氨基端实现a互补，可用于蓝白斑筛选。
● 操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
以下实验以100 μl感受态细胞为例。
2 向感受态细胞悬液中加入目的DNA（100 μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3 将离心管置于42℃水浴中放置45-90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4 向每个离心管中加入500 μl 无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟（150转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5将离心管内容物混匀，吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。
注：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）
注意事项：1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到。

更多有关DH5α化学感受态细胞 细胞及免疫学的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·2×pfu PCR MasterMix
编号：RFT093
规格：500μl|5×500μl
● 储存条件: -20℃可长期保存；4℃稳定贮存3个月。经常使用时，一旦融化后请4℃贮存，尽量避免反复冻融。
● 产品简介：
本产品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×。使用时，只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应，可限度的减少人为误差，具有快速简便、稳定性好等优点。用于高保真的DNA*(代＇片＇)段的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物为平滑末端，不可以直接用于TA克隆，要通过平滑末端克隆法进行克隆。
● 质量控制：以λ DNA为模板，可以很好扩增5kb的DNA*(代＇片＇)段；以水稻基因组为模板，可以很好扩增3.2kb的DNA*(代＇片＇)段。
● 使用说明：1. 冰浴中彻底融化2×MasterMix，混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系： 50μl反应体系 终浓度
2×MasterMix 25μl 1×
上游引物 10μM 1-5μl 0.2-0.8 μM
下游引物 10μM 1-5μl 0.2-0.8 μM
模板 × μl 10pg-1μg
水 补至50μl
3. 快甩离心将反应液收集到管底。
4. PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
5. PCR仪上执行以下程序：步骤 温度 时间 循环数
初始变性 94℃ 5 min 1
变性 94℃ 30 sec 25-40*
退火 Tm-5℃* 30 sec
延伸 72℃ 0.5kb/min
延伸 72℃ 5 min 1
*注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定的反应条件（温度、时间等）。
6. 电泳检测。
注：使用含染料的2×MasterMix可以直接上样；不含染料的2×MasterMix要与6×loading buffer混合后上样。


DH5α化学感受态细胞 细胞及免疫学