RNA pull down 辉骏生物——RNA pull down实验

一、技术概述
        RNA pull down是体外研究RNA与蛋白互作的重要技术。该技术通过体外转录靶RNA的一部分或全长，用生物素标记转录产物，再与蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素磁珠结合，从而把靶RNA结合蛋白从蛋白提取液中分离出来。复合物从磁珠上洗脱下来，通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与靶RNA结合；通过质谱仪检测，可以筛选到与靶RNA结合的蛋白。
 
二、技术原理
        生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度的非共价作用；其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后，利用生物素和链霉亲和素之间的亲和作用，可以纯化出各种生物大分子复合物。

        RNA pull down实验是用生物素标记体外转录的靶RNA分子，再用链霉亲和素纯化出与靶RNA结合的蛋白复合体，洗脱得到RNA结合蛋白质。
 
三、RNA pull down_MS辉骏生物
       简介：体外转录目的RNA的一部分或全长，用生物素标记转录产物，再与链霉亲和素磁珠孵育使之固定在磁珠上，用以“pull down”互作蛋白，纯化的产物蛋白经质谱鉴定，即可筛选到与目的RNA可能互作的蛋白。

       应用：筛选与目的RNA互作的蛋白。
     
优势：1、体外直接转录目的RNA作为诱饵，避免了RNA互补探针导致的非特异性结果；
          2、GX、通量大，一次性获得可能与目的RNA互作的蛋白。

四、RNA pull down_WB
简介：RNA pull down-WB用于RNA pull down-MS筛选到的RNA互作蛋白验证。

五、技术应用
        靶RNA结合蛋白的验证或筛选。
 
六、辉骏生物技术流程
        RNA体外转录→与细胞/细胞核裂解液孵育→纯化互作蛋白→洗涤、洗脱互作蛋白→western-blot检测或质谱鉴定。
 
七、辉骏生物服务信息

八、辉骏生物RNA pull down服务须知

参考文献
        1.Identification of RNA-Protein Interactions Through In Vitro RNA Pull-Down Assays. Methods MolBiol 1480:99-113(2016).
       2.The long noncoding RNA ASNR regulates degradation of Bcl-2 mRNA through its interaction with AUF1. Sci Rep 6:32189 (2016).
       3.Silencing of the mRNA-binding protein HuR increases the sensitivity of colorectal cancer cells to ionizing radiation through upregulation of caspase-2. Cancer  Lett 393:103-112(2017).

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