载体构建(vectorconstruction)是分子生物学研究常用的手段之一。依赖于限制性核酸内切酶、DNA连接酶和其它修饰酶的作用,分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起,再导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。载体构建主要包括已有载体多克隆位点MCS的改造和已有载体启动子、增强子、筛选标记等功能元件的改造。载体构建完成后可利用PCR原理进行测序验证。
载体构建实验步骤:
1)引物设计,PCR扩增目的片段
2)酶切目的片段与载体
3)连接或重组
4)载体构建转化
5)涂板
6)挑取克隆酶切或PCR鉴定
7)载体构建测序验证