内毒素清除专用亲和介质50mL成分特点:
1. 常温保存时间长达半年,方便了拭子样品的野外采集和长途运输。
2. 使用广泛,适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、拭子等。
3. 价格实惠,提供的试剂足够保存 200 个拭子样品。
4. 跟各种纤维棉拭子兼容。但使用本公司专用拭子效果更佳(因为所有优化都是在此专用 拭子的基础上完成的,80801B 包装含 200 只专用拭子)。
5. 保存的拭子可以用柱式拭子 DNAout(CAT#:80801)提取其 DNA,从一个拭子一般 可以提取到 0.5 ug 左右的 DNA。
6. 一个样品可以用一个微型离心管保存,Z大程度地避免了样品间的交叉污染。
7. 试剂本身安全环保无毒。
内毒素清除专用亲和介质50mL成分导致核酸降解的常见非酶因素原因:
机制溶液中残留重金属离子 磷酸二脂键的断裂 长期存放/光照产生的自由基 磷酸二脂键的断裂 UV 形成嘧叮二聚体 DEPC 使 RNA 中没配对的腺嘌呤羧甲基化,但对 双链核酸危害小 高温和低 pH 脱嘌啉反应(depurination) EB 导致可见光对 DNA 的光氧化 (photooxidation) 酚 其氧化产物使磷酸二脂键断裂 甲酰胺溶液 酸化后(pH 5)引起 RNA 降解 醚 残留过氧化物使磷酸二脂键的断裂 醇 残留重金属离子使磷酸二脂键的断裂 4℃ 短期保存的温度 -20℃ 如果溶液中有盐,将使核酸产生大量断裂 -70℃ 长期保存的温度,但冷凝状态下自由基 的破坏更活跃。
使用方法:
1. 将 10-30 mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到 50 mL 塑料离心管中。
2. 12000-15000 g 室温离心 5 分钟,弃上清(血浆)。
3. 将 20 mL 溶液 A 加入到血液细胞沉淀中,用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
4. 将 6 mL 的溶液 B 和 4 mL 加入到离心管中,剧烈震荡 30 秒。
5. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟,将上清液(为无色或浅红色)转移到另一干净离心管中。注意:转移的液体不要超过 25 mL,否则下一步不能加入等体积的溶液 C。为防止污染,Z好留少量上清液。下层有机相一般呈深红色,中间层为白色,含有 DNA,蛋白质和其他细胞破碎物,避免触及或吸取。
6. 加入等体积的溶液 C,充分颠倒混匀。
7. 分两次将溶液转移到离心吸附柱中,每次转移后 12000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 加 25 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。
9. 重复步骤 8 一次。
10. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的后续反应。
11. 将离心吸附柱转移到一个新的离心管中,加入 1mL RNA 洗脱液,室温放置 1-2 分钟。
12. 12000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子(BioTechniques,28:414,2000)。
14. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260 的 RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。人血 RNA 产率一般为 2-5 ug/mL。
15. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 2.0 左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。
大鼠白介素1受体关联激酶4(IRAK4)ELISA试剂盒 ,英文名: IRAK4 ELISA Kit
Human interferon gamma (IFN- gamma) ELISA Kit 人γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒
PlantGibberellicAcid,GAELISAKit 植物赤霉素(GA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
CLIAKitforCK-HMW(HumancytokeratinHighMolecularWeight)ELISAKit人高分子量细胞角蛋白规格:48T/96T
细胞脂质过氧化物(HYDROPEROXIDE)活性二甲酚橙(XYLENOLORANGE)比色法定量检测试剂盒50次
Ratbrain-gutpeptides,BGP/GehrelinELISAKit大鼠脑肠肽(BGP/Gehrelin)ELISA试剂盒规格:96T/48T
大鼠酸脱氢酶磷酸酶(PDP)ELISA试剂盒 ,英文名: PDP ELISA Kit
Rat estradiol (E2) ELISA Kit 大鼠雌二醇(E2)ELISA试剂盒
RatlymphocytefactorELISAKit 大鼠淋巴细胞因子ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
COXIgGVI柯萨奇病毒IgGⅥ(间接法二步法)
细胞乙醇脱氢酶III活性比色法定量检测试剂盒20次
RatComplement4,C4ELISAKit大鼠补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒规格:96T/48T
大鼠雌酮(E1)ELISA试剂盒 ,英文名: E1 ELISA Kit
Mouse collagen type II (Col II) ELISA Kit 小鼠Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)ELISA试剂盒
ELISA 小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 (mouse CTLA-4) 48T/96T 进口分装
CLIAKitforLHELISAKit鱼促黄体激素规格:48T/96T
通用型HHV6-B(HUMANHERPESVIRUS6-B)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次
ELISAKitGFAP猴子神经胶质纤维酸性蛋白规格:48T/96T
PANC-1, 人癌细胞 Human
大额牛与婆罗门牛杂交F1代皮肤成纤维样细胞;BOS-6
FSTL1 Others Mouse 小鼠 FSTL1 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
大鼠骨肉瘤细胞;UMR-106 肺腺癌细胞,LTEP-a-2细胞 MSCS细胞,猴的间充质干细胞
人纤维环细胞HAFC
IFNAR2 Others Human 人 IFNAR2 / IFNABR 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
人肾癌Wilms细胞;G401
TNFSF4 Others Cynomolgus 食蟹猴 OX-40L / TNFSF4 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
CL-0441SK-N-BE(2) (人神经母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2
HLF细胞,胚肺细胞 人前列腺上皮细胞,RWPE1细胞 人胚胎肌肉组织来源细胞;CCC-HSM-2
猕猴肺细胞;MML2
TNFRSF21 Others Human 人 DR6 / TNFRSF21 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
ESAM Others Rat 大鼠 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
CL-0403NCI-H524(人非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2
小鼠肺微血管内皮细胞完全培养基 100mL
293-mTLR5 人胚肾细胞 Human embryonic kidney cell line 293-mTLR5 DMEM+10% FBS+10ug/ml Blasticidin
IL36A Protein Human 重组人 IL1F6 / IL36A 蛋白 (His 标签)
NEC(人食管癌细胞) 5×106cells/瓶×2 22RV1(前列腺癌细胞)
CL-0403NCI-H524(人非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2
ACBD6 Others Human 人 ACBD6 杆状病毒-昆虫细胞裂解 (阳性对照) (变性)
人脐静脉内皮细胞总RNAHUVEC tRNA
Jecket细胞,淋巴瘤细胞 人肺腺癌细胞,SPC-A1细胞 EC109,人食管癌细胞
猫星形脑胶质细胞;PG-4(S+L-)
ACP5 Others Human 人 ACP5 / TRAP 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
人星形胶质细胞 (HA) (1×106 ) 小鼠皮层神经胶质细胞(EGFP标记) Mouse
CM-H076人心房肌细胞完全培养基100mL
OSM Others Mouse 小鼠 Oncostatin M / OSM 人细胞裂解 (阳性对照) (变性)
NCI-H929-UBC-EGFP(稳定株)人瘤细胞 NCI-H929-UBC-EGFP (stable strain) human myeloma cell 1640+20% FBS(热灭活)
IL25 Protein Human 重组人 IL25 蛋白 (Fc 标签)
小鼠角膜内皮细胞完全培养基 100mL
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