蛋白质提取试剂RIPA组织/细胞裂解液
货号 :R0020
规格 :100ml
本产品配有一支 PMSF(100mM,1.5ml)
保存 :RIPA 裂解液 4℃保存,PMSF -20℃保存。
产品简介 :
RIPA 组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜(包括核膜) 。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。
使用说明 :
如发现 RIPA 有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量, 取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF, 使 PMSF 的终浓度为 1mM, 混匀备用 (PMSF 现用现加) 。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液,用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 5-10×10 5 细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量) 。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟, 取上清, 即可进行后续的蛋白浓度测定、 SDS-PAGE、 Western blotting 和免疫沉淀等操作。
注意事项 :
1、 使用本裂解液可以裂解细胞核,释放出核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,造成细胞裂解液粘稠,此时可以直接加入蛋白上样缓冲液煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可入加少量 SDS(1%) ,煮沸后离心测浓度。
2、 本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒,请选择 BCA 法或者 Lowry 法检测蛋白浓度。
3、 如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清用于后续实验。
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蛋白质提取试剂RIPA组织/细胞裂解液订购说明:
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运输说明:
1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝专用的箱子,然后交付给合作快递,安全快速GX放心的送至客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
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