实验原理
miRNA是在真核生物中发现的具有调控功能的内源性非编码RNA,大小约20~25个核苷酸。我们根据成熟miRNA序列信息,合成含有茎环结构的前体miRNA连接至含侧翼序列的表达载体中,将其转染/病毒包装感染进入细胞后,由II型启动子(CMV)启动表达,经核酸酶的剪切加工,组装RNA诱导的沉默复合体,通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA,并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。实验流程
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