siRNA质粒构建-腺病毒构建和慢病毒构建包装

siRNA构建技术服务

本公司提供siRNA 载体的构建服务，siRNA 载体可以在细胞内直接转录出shRNA ，其干扰效果等同于siRNA ，而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息，包括基因的 mRNA 序列，Genbank Accession No. 和所属物种，本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列，在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体。可以为您节省大量的时间与精力。此方法是多种siRNA制备方法中WY可以进行长期基因沉默研究的方法。

闪晶生物siRNA载体构建服务程序：
1. siRNA表达载体的选用：
本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记，可以建立稳定表达系，同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因，可以无限扩增。
2. 设计siRNA靶序列
A 、根据目的mRNA序列，设计3条RNA干扰靶序列，靶序列一般为19 － 21nt 长。
B 、对于每条选定的siRNA 靶序列，设计 siRNA 正义链和反义链，以 loop(9nt) 相连，称为 shRNA（short hairpin RNA）。
C、阴性对照的设立.
3. 合成模板：
合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链，退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点，同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点，可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。
4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后，1 ％琼脂糖凝胶电泳，回收线性载体。
5. 连接与转化：
把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶，插入片断与载体的摩尔比约为 3 ： 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌，在LB Amp培养基上涂板，37 ℃培养过夜。
6. PCR 鉴定
7. 测序鉴定
8.柱抽提阳性克隆载体并定量。

收费标准 siRNA载体构建订单下载

闪晶生物同时提供腺病毒和慢病毒载体的构建服务

联系电话：021-  54460831-11  乘车路线：火车站坐1号地铁到终点,然后换乘5号线到北桥站即可。

 上海闪晶分子生物科技有限公司，主要为客户提供全面的生物学服务平台，主要有：

1）基因合成服务,引物设计合成，密码子优化，DNA测序 , TA克隆

2) RNAi 服务，RNAi 载体构建、RNAi 导入优化和干扰评价

3) 蛋白表达与纯化服务，包括哺乳动物、细菌、酵母和病毒表达

4)多克隆抗体制备和纯化：公司拥有cDNA文库

5) 基因表达分析服务，实时定量PCR，Western Blot，探针设计合成

6) 克隆服务，TA克隆、PCR 克隆和亚克隆、基因突变、载体设计和病毒构建包装等专业服务

7）多肽合成：

8）细胞转染：包括细胞培养，MTT检测，瞬时稳定转染

9）我公司还出售微型高低离心机，分子生物试剂，实验耗材，广口瓶等。
 
我们相信自己的经验、技术与能力将能为客户提供更“贴心”的产品与服务，将帮助科研人员快速、GX获得优质数据，加速生物学、医学类成果的产生与转化。
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