CRISPER-CAS系统稳转细胞系构建_详细资料

产品信息 服务名称： CRISPER-CAS系统稳转细胞系构建提供商：艾柏森生物 步骤服务内容服务描述 1 实验方案设计根据客户所需敲除基因的需求，设计实验方案，可以根据客户需求定制服务 2 GFP-CRISPR/Cas9 质粒设计合成根据客户提供的待沉默基因序列，设计GFP-CRISPR/Cas9 质粒并合成质粒 3 病毒同源重组将携带目的基因片段的穿梭质粒线性化后与腺病毒大骨架质粒共转入在特定的大肠杆菌中进行同源重组，由于腺病毒骨架质粒是氨苄抗性，而与穿梭质粒同源重组后，氨苄抗性丢失，同时表达卡那霉素抗性，因此，通过抗性的变化可筛选出腺病毒载体骨架重组子，挑取重组子进行酶切鉴定，挑选酶切鉴定正确的克隆，进行下一步腺病毒载体的包装。 4 病毒包装将筛选到的重组腺病毒运用脂质体法转染到细胞中，由于腺病毒载体基因组中的早期基因E1缺失，利用带有E1基因的细胞作为包装细胞，一至两周即可包装出E1缺失的腺病毒载体，通过倍比扩增，富集病毒颗粒。对绝大多数的细胞株可以达到近乎的感染效率。 5 结果交付交付具有高感染效率的病毒；被病毒感染的稳转细胞系；（还可提供GFP-CRISPR/Cas9 质粒） 实验报告包含上述每个步骤的详细报告，所用试剂，实验耗材等信息；包含病毒感染报告。

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步骤	服务内容	服务描述
1	实验方案设计	根据客户所需敲除基因的需求，设计实验方案，可以根据客户需求定制服务
2	GFP-CRISPR/Cas9 质粒设计合成	根据客户提供的待沉默基因序列，设计GFP-CRISPR/Cas9 质粒并合成质粒
3	病毒同源重组	将携带目的基因片段的穿梭质粒线性化后与腺病毒大骨架质粒共转入在特定的大肠杆菌中进行同源重组，由于腺病毒骨架质粒是氨苄抗性，而与穿梭质粒同源重组后，氨苄抗性丢失，同时表达卡那霉素抗性，因此，通过抗性的变化可筛选出腺病毒载体骨架重组子，挑取重组子进行酶切鉴定，挑选酶切鉴定正确的克隆，进行下一步腺病毒载体的包装。
4	病毒包装	将筛选到的重组腺病毒运用脂质体法转染到细胞中，由于腺病毒载体基因组中的早期基因E1缺失，利用带有E1基因的细胞作为包装细胞，一至两周即可包装出E1缺失的腺病毒载体，通过倍比扩增，富集病毒颗粒。对绝大多数的细胞株可以达到近乎的感染效率。
5	结果交付	交付具有高感染效率的病毒；被病毒感染的稳转细胞系；（还可提供GFP-CRISPR/Cas9 质粒）
	实验报告	包含上述每个步骤的详细报告，所用试剂，实验耗材等信息；包含病毒感染报告。