货号:
YSRIBIO-C0300
保存条件:
低温冷藏
供应商:
上海研生
保质期:
详见说明书
CAS号:
详见说明书
英文名:
详见说明书
数量:
30
规格:
100管/48样
培养操作步骤:
1.辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒(微量法)价格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 中文名称:辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒(微量法)价格
英文名称:详见说明书
产品规格:100管/48样
发货周期:1~3天
发货周期:1~3天测定意义:辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可YZ糖酵解和TCA循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。测定原理:分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。需自备的仪器和用品:可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项:
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或ZL,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在产品:
Enterobacter sakazaki阪崎肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒SRD1英文名称TPH2G酸受体γ1/GABAA Rγ1抗体Enterobacter spp.肠杆菌属通用PCR试剂盒14-3-3 family protein英文名称TXNDC11酸化γ酸γ2受体抗体Enterobacter spp.肠杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒SPRR1a英文名称TUBA4AG酸受体γ3/GABAA Rγ3抗体Enterobacter spp.肠杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒SPRR3英文名称DYNLT1G酸受体ε/GABAA Rε抗体Enterococcus casseliflavus铅黄肠球菌PCR试剂盒Sidekick 1英文名称TNFAIP8L2γ-酸受体相关蛋白抗体Potassiumtartrate,hydrate规格:>98%,BRSidekick 2英文名称TPORG酸A型受体θ/GABAA Rθ抗体Potassiumsulfate规格:含量测定SorLA/LRP9英文名称TMPRSS5G酸A型受体rho1 /GABAA Rρ1抗体Potassiumstearate规格:>98%,BRSDHC英文名称TBR2G酸A型受体rho2 /GABAA Rρ2抗体HPLC≥98%垂体腺苷酸环化酶激活肽检测试剂盒20mgAANATPotassiumstandard规格:500mg/L,溶剂:水HPLC≥98%垂草扁桃酸检测试剂盒20mgLEPotassiumstandard规格:100µg/mL,基体:1%HClHPLC≥98%穿孔素/成孔蛋白检测试剂盒20mgSA
辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒(微量法)价格Hyaluronan Synthase 33-氯-2-氟酚Hyaluronan Synthase 14-氯-2-氟酚HBxAg4-氯-3-氟酚β-Defensins 1302,6-二溴-4-氟酚YFV-IgM 2,5-二氟酚Adp-Ribosyltransferase13,5-二氟酚Nestin4-氟-2-硝基酚tetrahy drofolate reductas2-硝基-4-(三氟基...Endomorphin24-硝基-3-(三氟基...β-endorphin receptor4-溴邻二酚
温馨提示:不可用于临床ZL。