耐高温M-MLV逆转录酶北京厂家

特别提示：包括耐高温M-MLV逆转录酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：耐高温M-MLV逆转录酶
英文名称：BalbScriptII Reverse Transcriptase
产品货号：JN0014
产品规格：10kU

  本制品是在百奥莱博普通M-MLV（RNase H-）逆转录酶基础上，进一步进行遗传改造，除保留普通M-MLV(RNase H-）的特性外，极大的提高了其热稳定性，其Z适反应温度由普通M-MLV（RNase H-）逆转录酶的42℃提高到65℃，并且常温保存24小时仍然具有良好的逆转录活性。该制品还极大的缩短了逆转录时间，逆转录10min即可得到至少1500bp目的基因条带。该制品转录效率高，热稳定性好，反应时间短，可用于GC含量高或者具有二级结构的RNA的逆转录，稀有样品的逆转录等。

产品组成：

组份	JN0014-10kU
耐高温M-MuLV反转录酶(200 U/μl)	25μl
5×M-MLV Buffer	1ml

产品用途：
1、1st-Strand cDNA的合成。
2、cDNA Probe的制备。
3、RT-PCR反应以及一步法RT-PCR。
4、qPCR。

注意事项：
1、用DEPC处理实验用到的所有管子和枪头，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，整个实验过程戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
2、确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。
3、纯化过的RNA要保证不含有盐，金属离子，乙醇和běn酚，因为以上成分会干扰链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。

实验步骤：
链cDNA合成反应体系：
1、按下表顺序加入反应物。
2、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将模板和引物的 混合液轻轻混匀，短暂离心，65℃孵育5分钟，冰上冷却，离心，再置于冰上冷却。
3、轻轻混匀，离心。
4、如果使用Oligo(dT)18或者基因特异型引物，42℃-65℃孵育60分钟。 如果使用随机六聚体引物，25℃先孵育5分钟，随后42℃-65℃孵育60分钟。
5、75℃加热5 min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应或者在-20℃保存少于一周的时间。如想延长保存时间，建议使用-70℃保存。

常用反应体系：

模板RNA	总RNA（0.1 ng - 5 μg） poly(A) mRNA（10 pg - 0.5 μg） 特异性RNA（0.01 pg - 0.5 μg）
引物	Oligo (dT)18引物1μl 随机六聚体引物1 μl 基因特异性引物15-20 pmol
5×Reaction Buffer	4ul
RNA酶YZ剂(20U/ul)	1ul
dNTP(各10mM)	2.0μl
耐高温M-MuLV反转录酶（200U/ul）	1μl
ddH2O(Nuclease Free)	至20μl

应用实例：

图例一）耐高温M-MuLV反转录酶应用效果。
以1ug小鼠胚胎总RNA逆转录后，取1ul逆转录产物进行GAPDH(500bp)和小鼠RNA酶YZ剂基因(1500bp)进行PCR扩增，反应体系：20ul。

质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%，PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

活性定义：以Poly（rA）?Oligo（dT）为模板/引物，在55℃、10分钟条件下，掺入1 nmol的[3H] dTTP所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

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