ELISA实验技术服务

ELISA实验技术服务     

      酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbnent assay，ELISA）是利用蛋白和聚苯乙烯表面疏水吸附的特性，将抗原-抗体特异性结合反应固定于固相载体表面进行，同时结合酶对底物的GX率催化作用而产生高灵敏的检测效果。用于定量测定，可以有效检测出浓度为pg/L级的待测物。是一种灵敏GX的体外检测手段，广泛用于研究和体外诊断。

      方法一：用于检测未知抗原的双抗体夹心法：

      1.　包被：用0.05 M pH9的碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10 μg/mL，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1 mL，4°C过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟；

      2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1 mL于上述已包被之反应孔中，置于37℃孵育1小时，然后洗涤（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）；

      3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1 mL，37°C孵育0.5～1小时，洗涤；

      4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1 mL，37℃ 10～30分钟；

      5.　终止反应：于各反应孔中加入2 M硫酸0.05 mL；

      6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果，反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示；也可测OD值，在ELISA检测仪上，于450 nm（若以ABTS显色，则410 nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

      方法二：用于检测未知抗体的间接法：

      用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10 μg/mL，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1 mL于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1 mL，37°C孵育30～60分钟，洗涤，一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

      1. 本实验可以检测以下样本：

        1） 血清：在室温自然凝固后，离心20分钟（2000-3000 rpm），收集上清。

        2) 血浆：根据具体的实验目的选择EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后离心20分钟（2000-3000 rpm），取上清进行实验。

        3) 尿液、脑脊液等：使用无菌收集管，离心20分钟（2000-3000 rpm）。仔细收集上清完成实验。

        4) 细胞培养上清：如果分泌成分在培养基中，可以直接检测上清。如果待测是细胞，应仔细收集细胞，通过反复冻融释放出细胞内成分，离心取上清进行检测。

        5) 组织标本：切取标本后称重，加入一定量的PBS或组织蛋白萃取试剂，并加入蛋白酶YZ剂，充分匀浆。离心20分钟左右（ 2000-3000 rpm），收集上清置于-20℃或-80℃ 保存。如有必要，可将样品浓缩干燥，分装后一份待检测，其余冷冻备用。

      2. 样本保存及传递：

        1） 3天内测定的标本可放置在4°C，否则需低温冻存运输。

        2） 周期批量收集的样本即使分装后放在-20°C或-80°C中保存，避免反复冻融。注：2-8 °C可保存 72小时，-20 °C 可保存1个月。-80 °C可保存6个月。

      3. 实验周期：实验周期一般在收到样品后7-14个工作日；

      4. 若另有疑问欢迎向本公司咨询，我们将竭诚为您服务。

      1.权威的实验结果报告及结果分析（本公司承诺检测结果准确、客观、可信，但不保证得到某一特定结果。）；

      2.真实的原始实验数据；

      3.详细的实验步骤。