一步法RT-PCR试剂盒北京厂家

特别提示：包括一步法RT-PCR试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：一步法RT-PCR试剂盒
英文名称：BalbScript One-Step RT-PCR UltraMix
产品货号：JN0006
产品规格：200次

  本试剂盒是基于本公司BalbScript Reverse Transcriptase反转录酶（Cato: JN0011）和HotStart Taq DNA聚合酶（Cato: JN0023），对缓冲液体系进行优化使反转录酶和聚合酶同时发挥zuì大功效，具有方便、快速、灵敏度高、重复性好等特点。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，cDNA合成和PCR反应在一个管中进行，反转录结束后可直接进行PCR循环而不用增加额外的步骤；同时可对低至1fg的总RNA进行扩增，有助于大量样品的处理并减少污染机会。

产品特点：
1、效率高，可反转录GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。
2、独特的缓冲体系使反转录酶和聚合酶同时发挥zuì大功效。
3、操作简单，可zuì大限度的避免污染。

试剂盒组成：

组份	JN0006-200次
BalbScript RT Enzyme Mix	200μl
2×BalbScript One-Step RT-PCR UltraMix	1ml×2
RNase Free Water	1ml×2

注意事项：
1、本试剂盒PCR扩增延伸时间为1kb/min，客户可根据具体片段长度进行延伸时间的调整。
2、通常情况，28～30个循环可达到zuì佳扩增，对于低拷贝目的基因的检测，可将循环数增加到40个。
3、如果同时操作多个样品，建议先在冰上先配制预混液，然后再分装到各个反应管中，加入模板启动反应。
4、反应出现目标条带拖带，系模板浓度过高或特异引物浓度不适等原因所致，可对模板及引物浓度等进行调整；反应出现杂带，可对退火温度进行调整，或重新设计特异性高的引物。
5、本试剂盒只需使用特异性反转录引物，无需使用Random Primer和OligodT Primer等进行反转录反应。
6、为了保证反应的正常进行，需使用高质量的RNA模板。

操作方法：
1、将RNA模板、引物、2×BalbScript One-Step RT-PCR UltraMix，BalbScript RT Enzyme Mix和RNase Free Water 溶解并置于冰上备用。
2、配制以下反应体系：

组分	体积
模板RNA	0.1ng-5ug
BalbScript RT Enzyme Mix	1μl
2×BalbScript One-Step RT-PCR UltraMix	10μl
上游引物,10μM	0.5-1μl
下游引物,10μM	0.5-1μl
ddH2O	至20μl

3、轻轻混匀后短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、设置反应程序：

温度	时间	循环数
42℃	5min/500bp
95℃	5min
95℃	20秒	25-30次循环
57℃	20秒
72℃	根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

应用实例：

图例一）小鼠胚肝总RNA使用百奥莱博一步法RT-PCR扩增。
泳道1-9总RNA量分别为1ng-0.01pg，10倍梯度稀释，目的基因：GAPDH，扩增灵敏度可达到0.1pg。

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