特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应北京一步法RT-PCR试剂盒优惠促销,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京一步法RT-PCR试剂盒优惠促销
编号:WE0129
规格:100次
英文名:UltraRT One Step RT-PCR Kit
品Pai:百奥莱博
产地:北京
本试剂盒是专为一步法RT-PCR实验研制,逆转录和PCR在同一反应体系中进行,反应过程中无需添加试剂,无需打开管盖,在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。本试剂盒包括全新GX逆转录酶、快速热启动DNA聚合酶,同时包含适用于逆转录和PCR扩增的反应缓冲液和实验中所必需的其它组分。UltraRT逆转录酶RNase H活性缺失,减少了逆转录反应中RNA的降解。该逆转酶逆转录效率高,可对少量RNA模板进行良好的逆转录反应。PCR反应使用的快速热启动DNA聚合酶具有扩增效率高、特异性强、延伸速度快的优良性能。独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥功效。使用本试剂盒扩增得到的目的产物3"端附有一个″A″碱基,可直接用于T/A克隆。
试剂盒组成:
组份 | 100次 |
UltraRT OneStep EnzymeMix | 50μl |
2×UltraRT OneStep Buffer | 1.4ml |
RNase-Free Water | 1.5ml |
注意事项:
1、在操作过程中应避免RNase污染,防止RNA降解或实验中的交叉污染,建议在专门的区域进行RNA操作,使用专门的仪器和耗材,操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并在120℃下高压灭菌30分钟后使用,或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃,避免反复冻融。
4、本试剂盒必须使用特异性引物,引物的选择可根据具体实验来选择,引物设计的好坏直接影响到RT-PCR 反应的结果,设计引物时需考虑GC含量,引物长度,引物位置,PCR产物的二级结构等因素,建议采用专业的引物设计软件来设计。
使用方法:
1、将RNA模板、引物、OneStep RT-PCR Buffer、UltraRT OneStep RT-PCR EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系:
试剂 | 25μl反应体系 | 终浓度 |
2×UltraRT OneStep Buffer | 12.5μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 1μl | 0.4μM |
Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.4μM |
UltraRT OneStep EnzymeMix | 0.5μl | |
RNA Template | Xμl | 1 pg–1μg |
RNase-Free Water | up to 25μl | |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
3、涡旋震荡混匀,短暂离心,将溶液收集到管底。
4、将热循环仪预热到45℃,将PCR管置于热循环仪中,进行RT-PCR反应。
反应条件:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
反转录 | 45℃ | 30 min | |
PCR预变性 | 95℃ | 2 min | |
变性 | 94℃ | 30 s | 30-40 个循环 |
退火 | 55-65℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 30 s |
终延伸 | 72℃ | 5 min | |
注意:
1)一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,退火时间一般为20-30秒,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间根据扩增的片段大小设定,本产品中包含的DNA Polymerase扩增效率为1 kb/30s。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少,扩增量不足;循环次数多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。
5、反应结束后取5μl反应产物,加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
欲了解更多
北京一步法RT-PCR试剂盒优惠促销的品Pai、产地、价格及说明书等产品信息,请致电北京百奥莱博科技有限公司,我们将竭诚为您服务,另外,以下产品正在火爆促销:
·FITC标记驴抗山羊IgG(H+L)
编号:WE0364
英文名称:Donkey Anti-Goat IgG, FITC Conjugated
规格:100μl
本产品为FITC标记的经亲和纯化的驴抗体,特异识别山羊IgG,检测灵敏度高,本底低,对其他种属IgG无明显交叉反应,常用于免疫荧光和流式细胞等标记检测。FITC即硫*酸荧光素,为一种常用荧光染料,常用于免疫荧光和流式细胞检测等多标记检测。经本荧光抗体染色的标本,在荧光显微镜下观察呈现明亮的绿色荧光。
免疫原:山羊IgG
缓冲液:0.01M PBS,50%甘油,pH7.6
稳定剂:15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂:0.05%叠氮*
荧光团:FITC,Amax=492; Emax=520
应用范围:对于大多数实验(1:50-200)
·HRP标记兔抗山羊IgG(H+L)
编号:WE0387
英文名称:Rabbit Anti-Goat IgG, HRP Conjugated
规格:100μl
本产品为辣根过氧化物酶标记的经亲和纯化的兔抗体,特异识别山羊IgG,检测灵敏度高,本底低,可用于Western Blot、ELISA和免疫组化检测。HRP(Horseradish Peroxidase)即辣根过氧化物酶,可以催化DAB、TMB等底物显色或催化ECL等化学发光试剂产生化学反应而发光。
免疫原:山羊IgG
缓冲液:0.01M PBS,50%甘油,pH7.6
稳定剂:无
防腐剂:无(叠氮*是HRPYZ剂,抗体稀释液中请避免使用叠氮*作为防腐剂)
应用范围:
WB(1:2000-10000)
ELISA(1:2000-20000)
IHC(1:100-200)
北京一步法RT-PCR试剂盒优惠促销关键词:UltraRT One Step RT-PCR Kit,WE0129,一步法RT-PCR试剂盒
·HRP标记驴抗兔IgG(H+L)
编号:WE0366
英文名称:Donkey Anti- Rabbit IgG,Peroxidase Conjugated
规格:100μl
本产品为过氧化物酶标记的经亲和纯化的驴抗体,特异识别兔IgG,检测灵敏度高,本底低,可用于Western Blot、ELISA 和免疫组化检测。酶标记抗体,是一类广泛用于免疫学、分子生物学及临床医学各个分支学科中的免疫化学制剂,具有特异、敏感和安全的特点。
免疫原:兔IgG
缓冲液:0.01M PBS,50%甘油,pH7.6
稳定剂:15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂:无(叠氮*是HRPYZ剂,抗体稀释液中请避免使用叠氮*作为防腐剂)
应用范围:
WB ECL发光检测(1:10000-200000)
ELISA(1:5000-100000)
WB 显色检测(1:5000-100000)
Immunohisto/cytochemistry(1:500-5000)
北京一步法RT-PCR试剂盒优惠促销关键词:UltraRT One Step RT-PCR Kit,WE0129,一步法RT-PCR试剂盒
SY0011 TOP10化学感受态细胞 TOP10 Chemically Competent Cell
HR0207 细菌蛋白快速提取试剂盒(离心柱法) Rapid extraction of bacterial protein Kit (centrifugal column method)
KFS334 Ki67细胞增殖检测试剂盒(IHC法) Ki-67 cell proliferation Detection Kit(IHC)
SV0151 BpuEI限制性内切酶 BpuEI Restriction Endonuclease
SY0363 甲叉双丙*(代"烯")酰胺 Bis-Acrylamide
BTN131211 96孔板PCR片段纯化回收试剂盒(真空法) PCR fragment Purification Kit(with 96-wells plate)
YT053 非变性PAGE蛋白上样缓冲液(5X) Non-denatured Gel Sample Loading Buffer
SV1030 T3 DNA 连接酶
BTN60204 非酶多糖清除剂(RNA样品专用) Non-enzymatic Polysaccharide Scavenger
BTN131055 TCEP盐*(代"酸")膦 TCEP·HCl
YT406 Klenow片段 Klenow Fragment
ALH068 细胞组织DNA/RNA/蛋白分离纯化提取试剂盒 Tissue Cells DNA/RNA/microRNA/Protein Extraction & Isolation Kit
BTN120626 UTP溶液(100mM) UTP Solution,100mM
BTN100842 EDTA溶液(0.5M,pH8.0)(DNA级)
SY0115 pGMLR-TK海肾荧光素酶报告基因质粒 pGMLR-TK luciferase reporter Plasmid
HR0391 透析袋27mm,截留分子量7kd Dialysis bag 27mm, entrapped MW 7kd
WE0144 实时荧光定量PCR的预混体系(探针法) BaldStar TaqMan Mixture
SV0435 Hpy99I限制性内切酶 Hpy99I Restriction Endonuclease
SY0477 TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 647) TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 647)
KFS237 p21蛋白检测试剂盒 p21 Detection Assay(Western Blot)
北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购北京一步法RT-PCR试剂盒优惠促销。
温馨提示:不可用于临床ZL。