特别提示:包括细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒
英文名称:Cell membrane / cytoplasm / nuclear membrane protein stepwise Extraction Kit
产品货号:HR8005
产品规格:50T/100T
细胞膜蛋白/胞浆蛋白/核膜蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中分步提取细胞膜蛋白/胞浆蛋白/细胞核膜蛋白/核内蛋白。提取过程简单方便,可在2小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶YZ剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
储存条件:蛋白酶YZ剂-20℃保存;磷酸酶YZ剂2-8℃保存;蛋白提取液2-8℃保存。
有效期:一年。
注意事项:
●本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或ZL。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品Pai的试剂混用,否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品特点:
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
4.蛋白酶YZ剂YZ了蛋白的降解,蛋白酶YZ剂配方优化。蛋白酶YZ剂混合物包含7种独立的蛋白酶YZ剂;每一种YZ剂可特异性YZ某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以YZ几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 涡旋振荡器 ●冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶YZ剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶YZ剂单品。
蛋白提取步骤:
1.提取液制备:每400μl冷的蛋白提取液A/D中加入分别加入2μl蛋白酶YZ剂混合物和2μl磷酸酶YZ剂混合物,混匀后置冰上备用。
2.取5-10×106个细胞①,在4℃,1000rpm条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,用细胞刮刀收集细胞。(组织样本50-100mg 剪碎,加冷PBS,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨),冰上静置5分钟,小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。在4℃,500g条件下离心2-3分钟,弃上清。)
3.用冷PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4.每5×106个细胞中加入400μl冷的蛋白提取液A,混匀后,在4℃条件下用试剂盒所配针筒反复吸吹细胞,使细胞完全破裂。
5.在4℃,1000g条件下离心5分钟。
6.快速将上清(I)吸入另一预冷的干净离心管,在沉淀中加入200μl冷的提取液B,高速涡旋振荡15秒。
7.将混匀的提取液B 置2-8℃振荡1-2小时,至沉淀充分裂解,沉淀明显减少。
8.37℃水浴10分钟,37℃下②1000g-2000g 力离心5分钟,此时溶液分为两层(对着光线看),上层为核内蛋白,下层是核膜蛋白约为20-40μl。小心移除上层,用1-2倍体积的提取液D溶解下层即为细胞核膜蛋白。
9.在步骤6中所得到的上清(I)中加入5μl提取液C,充分混匀。37℃水浴10分钟。
10.37℃下② 1000g离心3分钟,此时溶液分为两层(对着光线看),上层是胞浆蛋白部分,下层是细胞膜蛋白部分约为40-50μl。
11.将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白。
12.用80-200μl冰冷的提取液D溶解步骤10中的下层部分,即得细胞膜蛋白。
13.将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
注:
①细胞数量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,请根据实际情况调整。
② 必需保证在37℃左右下离心,至少确保30℃以上。无可控温的离心机时,用常温的离心机在室温离心即可,适当缩短离心时间至2-3分钟。
③ 建议用BCA 法进行蛋白定量。
④蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
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温馨提示:不可用于临床ZL。