JOSK-M人急性单核细胞白血病细胞系 专业技术指导 专注复苏

JOSK-M人急性单核细胞白血病细胞系 专业技术指导 专注复苏
INS-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：不规则，多角；细胞传代方法：1：3—1：6传代，每周换液2—3次
TEV-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HBVP细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好Z至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净ZDT里备用，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW264.7，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。
SNU-449细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；多角形；细胞传代方法：1：5-1：10传代；每周2-3次
GES细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：悬浮
hRPE细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Brewer厌氧菌琼脂，英文名：Brewer Anaerobic Agar，用途：用于厌氧菌和微需氧菌的培养
Leeming-Notman培养基基础，英文名：Leeming-Notman Medium，用途：用于马拉色菌的培养，每80ml添加1.6ml橄榄油
酸性肉汤，英文名：Acid Broth，用途：用于酸性罐头食品无菌检验
庆大霉素琼脂基础，英文名：Gentamicin Agar Base，用途：用于霍乱弧菌选择性分离,每100ml添加1支庆大霉素琼脂基础添加剂
细胞形态特性：详见细胞说明书
甘露醇化钠琼脂/甘露醇盐琼脂，英文名：Manitol Salt Agar，用途：用于金黄色葡萄球菌选择性分离
DCR培养基，英文名：DCR Medium，用途：含蔗糖和琼脂，用于松、杉等植物的组织培养
HEL细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代。3天内可长满。
MA891细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RuCa细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠6-羟多巴胺(6-OHDA)ELISA试剂盒，英文名：Mouse 6-OHDA ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠血管粘附蛋白1(VAP-1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse VAP-1 ELISA Kit，规格：48T/96T
TSN琼脂，英文名：Trypticase Sulfite Neomycin Agar，用途：用于产气荚膜梭菌的选择性分离和计数
细胞背景资料：急性单核细胞白血病；男性
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏：冻存细胞较脆弱，要轻柔操作。冻存细胞要快速融化，并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感，离心去除冻存培养基，然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数，细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml；培养细胞12到24小时，更换新鲜的完全生长培养基，去除冻存剂。离心方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基，轻轻混匀；以大约80x离心2到3分钟；弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。细胞铺板，细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化：一个成年人全身细胞总数约1012个，可以区分为200多种不同类型的细胞：形态结构，代谢，行为，功能等各不相同。追根溯源，这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以，通常把发育过程中，细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段，也发生在胎儿出生以后，乃至成人阶段。例如，人体血细胞的产生和分化，这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞，转入分化，通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞，它们的基因表达和代谢活动各不相同。
Korser氏柠檬酸盐肉汤，英文名：Korser’s Citrate Broth，用途：用于柠檬酸盐利用实验
2×YT培养基，英文名：2×YT Medium，用途：用于重组大肠杆菌菌株的培养
亮绿红琼脂/红煌绿琼脂，英文名：Brilliant Green Phenol Red Agar，用途：用于沙门氏菌选择性分离
麦康凯(MAC)琼脂，英文名：MacConey Agar，用途：含结晶紫，3号胆盐,用于肠道菌的选择性分离
HCE1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
R3/1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PCK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Panc10.05细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
DMS 79细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：4传代；每周换液2-3次。
COR-L88细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
人Rififylin蛋白(RFFL)ELISA试剂盒，英文名：Human RFFL ELISA Kit，规格：48T/96T
人细胞色素P450c21A/21-羟化酶(CYP21A)ELISA试剂盒，英文名：Human CYP21A ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠α2-巨球蛋白(α2M)ELISA试剂盒，英文名：α2M ELISA Kit，规格：48T/96T
沙氏葡萄糖液体培养基，英文名：Sabouraud’s Glucose Broth Medium，用途：用于真菌培养
改良卵磷脂琼脂基础，英文名：Modified Letheen Agar Base，用途：用于中菌落总数计数，每升培养基需添加7g吐温80
SCCRAM肉汤，英文名：SCCRAM Broth，用途：用于沙门氏菌前增菌
KYSE450细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
NCI-H1385细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BHP 10-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
大鼠Tolloid样蛋白1(TLL1)ELISA试剂盒，英文名：TLL1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人趋化因子C-C-基元受体5(CCR5)ELISA试剂盒，英文名：Human CCR5 ELISA Kit，规格：48T/96T
人谷胱甘肽S转移酶μ2(GSTμ2)ELISA试剂盒，英文名：Human GSTμ2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人水痘带状疱疹病毒IgG(VZV-IgG)ELISA试剂盒，英文名：Human VZV-IgG ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-R3(STRAIL-R3)ELISA试剂盒，英文名：STRAIL-R3 ELISA Kit，规格：48T/96T
沙堡琼脂培养基，英文名：Sabouraud’s Agar Medium，用途：用于真菌杀灭试验
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(组酸/亮酸/色酸/尿嘧啶缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
CW琼脂基础(不含卡那霉素)，英文名：Clostridium Welchii Agar Base without Kanamycin，用途：用于加热材料魏氏梭菌检验,每250ml培养基需加2支50%卵黄盐水悬液或15ml无菌脱纤维绵羊全血
改良FM琼脂，英文名：FM Agar, Modified，用途：用于梭杆菌的分离和培养
肝浸液琼脂，英文名：Liver Infusion Agar，用途：用于布鲁氏菌及其它苛养菌的培养
CMK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
hUC-MSC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
NG108-15 [108CC15]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样　；细胞传代方法：1：6-1：10传代，每周换液2-3次
B16-F0细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
抗生素培养基C(PH7.0)，英文名：Medium C（PH7.0），用途：用于抗生素检测
H4-ⅡE细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H295R[H295R]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Hela299细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
接收细胞相关问题：如不能在收到细胞后及时操作细胞，T25及离心管发货的细胞将可以消毒后在37度过夜，血清发货的细胞在室温下静置1-2天(注意不要放冰箱)，干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升华，请即刻复苏细胞。T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心(1200rpm，5min)后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心(1000rpm，3min)收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。
Hela299细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。