CRISPR/Cas9敲除细胞系构建

根据给定GeneID或DNA序列，设计3个敲除位点，合成正负Oligo DNA，构建敲除载体，通过测序验证载体是否构建成功。在构建成功的基础上，中量摇菌，提取去内毒素的浓度达到1μg/μl 的质粒，并转染细胞，进行敲除效率验证。敲除效率验证一般在Hela细胞上进行，也可以在指定细胞上进行验证。在PCR扩增基因编辑区域的DNA后，通过测序验证敲除效率，一般测序峰图在敲除位点附近出现套峰时，说明该位点的敲除效率较高。
 

Cas9系统使目标区域的基因组断裂，利用基因组自身的非同源末端连接的修复机制，在完成修复的过程中，原断裂处会出现不可预知的插入、缺失、突变，从而将生物体（或细胞）中的基因改变成无功能性基因（无效等位基因：null allele）的一种遗传学技术。

2.1 通过将基因敲除的个体或细胞与正常的个体或细胞相比较，研究者可以揭示特定基因的功能。
2.2 在基因组水平上将目标基因修改或变成无效等位基因，遗传背景干净清晰，是研究基因功能的金标准。

3.1 CRISPR/Cas9技术优势
（1）在基因组水平上编辑目标基因，高度模拟目标模型。
（2）遗传背景干净清晰，多次重复实验结果更稳定。
（3）技术热点高增加文章的影响力。
3.2 RNAi技术的缺点
（1）仅部分YZ该基因的功能。
（2）在转录后（包括翻译）水平上下调基因表达，非基因组水平上的彻底改变！
（3）会出现每次实验间的误差。
（4）非特异性强；脱靶效率高（Smith et al., 2017. Evaluation of RNAi and CRISPR technologies by large-scale gene expression profiling in the Connectivity Map. PLoS Biol 15(11): e2003213. )

1.特有的检测手段可大大缩短服务周期
2.可同时进行支原体检测以及目标细胞株的STR鉴定
3.若实验未按预期完成，技术费用全免！
4.相邻的10bp内多位点的突变与单一点突变价格相同

 客户只需提供GeneID——基因分析以及细胞状态评估———构建载体——细胞转染——单克隆筛选——目标基因敲除的细胞株的获得