Western Ladder笔 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括Western Ladder笔 蛋白质研究在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：Western Ladder笔 蛋白质研究
编号：WE0294
规格：1000次
英文名：Western Blot Ladder Pen
品Pai：百奥莱博
产地：北京
  蛋白免疫印迹(WB)是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，经常用于检测抗体和抗原之间的特异性，而且能够对目的蛋白进行定性或定量分析研究。但是在试验中，抗原或者抗体往往都不是单一的成分，这些可能会导致在底片曝光出多条条带，或出现一些不明分子量的条带，或者目的条带的位置都不能确定。因此确定这些条带的分子量对我们进行下一步的分析就显得非常重要。
  目前，市场上有一些预染Marker，能很好监测我们的转膜效率，电泳转膜后能在杂交膜上看到Marker相应的条带，但是这些Marker 不能在底片上曝出条带。
  Western Blot Ladder Pen 正是要为您解决这个问题，通过转膜后对着预染Marker或经过丽春红染色确定的非预染Marker的各条带进行相应的标记，这些笔迹都能在目的位置曝光出相应的条带，用作分子量标准。同时也可以用它在膜上做其它标记，或者用作阳性对照。

注意事项：
1、本产品适用于HRP底物系统。
2、WB Ladder Pen使用完成后，请水平放置于2～8℃，请勿冻存于-20℃。
3、使用前请先将WB Ladder Pen在纸上画几笔之后再在膜上做相应的标记。
4、标记过程中请勿用力太大，以免破坏膜的结构，轻划即可。
5、随着笔使用时间的增加，信号可能会逐渐减弱。

操作步骤：

1、电泳的过程中，可以使用预染蛋白Marker或者非预染蛋白Marker。
2、常规的转膜后，将膜取下。
a. 使用预染蛋白Marker的NC膜：去离子水漂洗膜后，使用上下两层滤纸或者卫生 纸吸掉膜上多余的液体(请勿将膜吸的过干)。
b. 使用非预染蛋白Marker的NC膜：丽春红染膜后，用铅笔将非预染蛋白Marker的 各个条带标记。TBST漂洗膜，以完全去掉膜上的丽春红，使用上下两层滤纸或者 卫生纸吸掉膜上多余的液体(请勿将膜吸的过干)。
3、使用WB Ladder Pen在膜上做好相应的标记(轻划即可)，放置15秒之后将膜放置 于封闭液中封闭。
4、按常规步骤进行后续的WB试验。

储存条件：2～8℃

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BTN140587 B-5固定液 B-5 Fixative Solution
KFS053 Cy3标记抗小鼠免疫荧光染色试剂盒
SY0280 多片段一步法(快速/无缝)克隆试剂盒 Multi One Step Cloning Kit
YT366 碱性磷酸酶检测试剂盒 Alkaline Phosphatase Assay Kit
BTN140650 3mL亲和层析柱 Affinity Chromatography Colum(3mL)
HR0041 胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒 Cytoplasmic protein/nuclear protein/histone Extraction Kit
SV0971 Sulfolobus DNA 聚合酶 IV
YT013 基因组DNA小量提取试剂盒(适用于动物组织/细菌/昆虫) Genomic DNA Mini Preparation Kit with Spin Column
BTN3092 *化乙锭清除剂(EB清除剂) EB scavenger
SV1411 pTYB21 载体
SV0046 ApaI限制性内切酶 ApaI Restriction Endonuclease
KFS298 PDTC (NF-κBYZ剂/抗氧化剂)
SY0539 红细胞裂解液 Red Blood Cell Lysis Buffer
SV0603 PshAI限制性内切酶 PshAI Restriction Endonuclease
BTN130644 甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(FPG) "Formamidopyrimidine DNA
HR0492 中性红细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 Neutral red cell proliferation and cytotoxicity detection kit
Western Ladder笔 蛋白质研究关键词：WE0294,Western Ladder笔,Western Blot Ladder Pen


·一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(低含量ROX校正染料)
编号：WE0138
英文名称：SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit(Low ROX)
规格：100次
  本试剂盒是一步法Real-Time RT-qPCR专用试剂盒。所含的SYBR Green I荧光染料可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。全新GX逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解。该酶逆转录效率高，可对少量 RNA模板进行良好的逆转录反应。与RNA亲合性高，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。全新GX热启动酶，在常温下酶的活性被封闭，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥功效，提GX率。本产品灵敏度高，特异性高，线性范围广，对目的基因定量更准确。

ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。

不需要ROX校正的仪器:(WE0137)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0138)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0139)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0137-100次	WE0138-100次	WE0139-100次
2×SuperSYBR One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
SuperSYBR One Step EnzymeMix	50μl	50μl	50μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中的各试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、SuperSYBR One Step RT-qPCR Buffer中含有SYBR Green I 荧光染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4、本试剂盒中的各试剂应避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
5、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-PCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
6、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

操作步骤：
1、将RNA模板、引物、2×SuperSYBR One Step Buffer、SuperSYBR One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
SuperSYBR One Step EnzymeMix	0.5μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(optional)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-0.5μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为两步法)，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为例。
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	5 min
变性	95℃	10 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为参照设定。

RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为三步法)：
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10min
PCR预变性	95℃	5min
变性	95℃	15s	30-40 个循环
退火	56℃-64℃	30s
延伸	72℃	30s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1min
	95℃	15s
	60℃	15s

注意：
1)三步法PCR扩增时，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


Western Ladder笔 蛋白质研究关键词：WE0294,Western Ladder笔,Western Blot Ladder Pen


·抗Flag标签单克隆抗体
编号：WE0337
英文名称：Anti Flag-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
该抗体高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的Flag标签(DYKDDDDK)，而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的Flag-Tag融合蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG
免疫原：人工合成多肽(DYKDDDDK)
应用范围：
WB(1：500-5000)
IP(1：50-200)
IF/ICC、ELISA(需摸索稀释度)

·dNTP混合溶液(10 mM)
编号：WE0159
英文名称：dNTP Mix(1mM each)
规格：1ml|5ml
  本产品为高质量的脱氧核苷酸(dNTP)的混合物，包括等摩尔的dATP、dGTP、dCTP、dTTP。经过PCR检测的脱氧核苷酸，可与所有的耐热聚合酶配套使用。其中高纯dNTP纯度均达到99%以上，超纯dNTP纯度均达到99.9%以上，不含DNase和RNase。

使用方法：
dNTP(10 mM each)可直接使用，或用调节至中性(PH7.5 左右)的无菌超纯水稀释至适当浓度使用。可用于PCR反应、Real-time PCR、DNA序列测定、分子标记、cDNA合成等。

储存条件：-20℃。

·防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)
编号：WE0126
英文名称：Multiplex PCR MasterMix(UNG)
规格：1ml
  本品是由BaldStar Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs(含dUTP)、UNG酶以及PCR稳定剂等组成的PCR预混体系。使用本产品无需进行繁杂的PCR反应条件的优化过程，只需进行简单的条件摸 索即可轻松进行多重PCR反应。
  本产品所含的BaldStar Taq DNA Polymerase是经化学修饰的热启动酶，可以有效 减少PCR反应初期因引物错配而产生的非特异扩增。独特的缓冲体系，使多重PCR反 应所有的引物都能有效延伸，无需额外优化。此MasterMix中还包含GC Enhancer，有 助于实现“困难”模板(比如，高GC含量的模板)的GX扩增。本产品运用dUTP-UNG 防污染系统，可有效去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导 致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU 碱基PCR产物的形成。
  本品可有效防止PCR产物的残留污染，适用于防污 染多重PCR反应，比如微卫星分析、基因分型和SNP检测等。

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