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百奥莱博专业生产供应细菌膜蛋白质微量提取试剂盒 蛋白质研究,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:细菌膜蛋白质微量提取试剂盒 蛋白质研究
编号:BTN100929
规格:50次
英文名:Bacterial Membrane Protein Miniprep Kit
品Pai:百奥莱博
产地:北京
本试剂盒是基于超速离心的快速提取细菌膜蛋白的试剂盒。其原理是裂解细胞后,通过超速离心分离出细胞膜和附着的蛋白质。
产品特点:
1.一步式分离细胞膜和膜蛋白,密度梯度离心法简单快捷。
2. 膜蛋白纯度高,能够去除各种胞浆蛋白的污染,也能去除松散附着在细胞膜上的蛋白,所得膜蛋白主要是整合蛋白。
3. 膜蛋白完整性好,主要是由于实际中有YZ蛋白酶成分。
4. 回收效率高,一般能得到相当于总蛋白量6%的膜蛋白。
5.可用于E.coli,S.typhimurium,K.aerogens,P.aeruginosa,C.crescentus等细菌。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
溶液A | 125ml |
溶液B | 25ml |
溶液C | 250ml |
DNase I干粉 | 3.5mg |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输和保存,DNase I 需要低温保存。有效期一年。
使用方法:准备:次使用本试剂盒时需要将所有DNase I干粉倒入溶液B中,轻柔颠倒使DNase干粉溶解。未用完的部分需要放-20℃保存,Z好在一个月内完,否则DNase 将逐渐失去活性。此外,Z好在实验前1小时将溶液B冰浴预冷。
用法一:
小量制备(主要用于上样量比较小的SDS-PAGE电泳等实验)1.收集20-40mL 过夜培养的细菌饱和培养液(OD420在1.5左右即可),2500g室温离心10分钟后弃上清。
2.加入2mL溶液A,轻柔吹打,将细菌重悬于溶液A中。
3.2500 g室温离心10分钟后弃上清。
4.加入0.5mL溶液B(必须已经提前加入了DNase I干粉),轻柔吹打使细菌重悬。注:如果细菌起始量没有20-40mL,溶液A的用量可以等比例降低。重悬在溶液A中的细菌可以放-80℃长期保存。
5.用超声或French Press方法裂解细胞。如果用French Press方法,则需要处理至少两次,每次的压力为9.65×10E7(=14000 psi)。注意:不论用哪种裂解方法,都必须在显微镜下检查细菌是否已经裂解,否则还需要重复细菌裂解过程,直到80%以上的细菌都裂解为止。
6.2500g室温离心8分钟后小心转移上清到新的10mL-15mL塑料离心管中(如Beckman Optima 台式超速离心机离心管),弃沉淀(未破裂细胞)。
7.在上清(细菌裂解液)中加入5mL预冷的溶液C,轻柔颠倒混匀后冰浴放置30-60分钟。其间可以轻柔颠倒混匀3-5次。
8.用 Bechman Optima 台式超速离心机115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机,但离心力应该一致,否则有可能得不到沉淀。
9.小心移弃上清,在沉淀中加入0.2mL溶液A,充分吹打混匀。
10.用Beckman Optima 台式超速离心机 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机,但离心力应该一致,否则有可能得不到沉淀。
11.小心移弃上清,所得沉淀放-20℃长期保存,也可以直接加入0.1mL自备的,跟后续实验兼容的缓冲液(如1×SDS-PAGE上样液中,可从本公司购买),所得膜蛋白的浓度将在1mg/mL左右。
用法二:
大量制备(主要用于上样量比较大的2D电泳等实验)1.收集200-400mL 过夜培养的细菌饱和培养液(OD420在1.5左右即可),2500 g室温离心10分钟后弃上清。
2.加入20mL溶液A,轻柔吹打,将细菌重悬于溶液A中。
3.2500 g室温离心10分钟后弃上清。
4.加入5mL溶液B(必须已经提前加入了DNase I干粉),轻柔吹打使细菌重悬。注:如果细菌起始量没有200-400mL,溶液A的用量可以等比例降低。重悬在溶液A中的细菌可以放-80℃长期保存。
5.用超声或French Press方法裂解细胞。如果用French Press方法,则需要处理至少两次,每次的压力为9.65×10E7(=14000 psi)。注意:不论用哪种裂解方法,都必须在显微镜下检查细菌是否已经裂解,否则还需要重复细菌裂解过程,直到80%以上的细菌都裂解为止。
6.2500g室温离心8分钟后小心转移上清到干净的玻璃烧杯中,弃沉淀(未破裂细胞)。
7.在上清(细菌裂解液)中加入50mL预冷的溶液C,轻轻在冰浴中搅拌混匀30-60分钟。注:可以在大烧杯中装冰,然后将装有样品的小烧杯放入,在放入干净的搅拌子,以速度搅拌。
8.用 Beckman Type 55.2 Ti转头 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机,但离心力应该一致。
9.小心移弃上清,在沉淀中加入2mL溶液A,充分吹打混匀。
10.用Beckman Type 55.2 Ti转头 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机,但离心力应该一致。
11.小心移弃上清,所得沉淀放-20℃长期保存或溶解在1mL自备的,跟后续实验兼容的缓冲液(如1×等电点电泳上样液,可从本公司购买),所得膜蛋白的浓度在1mg/mL左右。
除
细菌膜蛋白质微量提取试剂盒 蛋白质研究外,我公司正在打折促销以下产品:
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SY0404 1ml重力层析空柱 Gravity Chromatography Columns
SV0236 BssHII限制性内切酶 BssHII Restriction Endonuclease
细菌膜蛋白质微量提取试剂盒 蛋白质研究关键词:BTN100929,Bacterial Membrane Protein Miniprep Kit,细菌膜蛋白质微量提取试剂盒
·1mL亲和层析柱
编号:BTN140649
英文名称:Affinity Chromatography Colum(1mL)
规格:1mL
本产品适用范围广泛,可用于纯化分离重组蛋白、抗体和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA结合蛋白等生物大分子;还可以用于去除生物样品中的内毒素等污染。
亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而发明的纯化技术。它是利用生物分子间存在的特异性相互作用(如抗原-抗体、酶-底物或YZ剂、激素-受体等),通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上,利用分子间亲和力的特异性和可逆性,对另一个分子进行分离纯化。
亲和层析柱常见的使用方法有重力法、手动加压法、蠕动泵法,其示意图如下:
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
常用亲和标签及纯化方案:细菌膜蛋白质微量提取试剂盒 蛋白质研究关键词:BTN100929,Bacterial Membrane Protein Miniprep Kit,细菌膜蛋白质微量提取试剂盒
·柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)
编号:BTN80803
英文名称:Animal mitochondrial DNA column extraction kit(PCR Grade)
规格:50次
线粒体DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料,但传统的两步式mtDNA提取方法是先温和裂解细胞,分离线粒体,然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制,需要针对不同组织材料单独进行优化。本试剂盒克服了上述缺点。
产品特点:1. 不需要单独纯化线粒体,柱式法纯化,操作简单快捷。
2. 得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3. 每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。
4. 注意:本产品只适合于动物材料,不适合于植物材料,因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。
产品组成: 成分 | 规格 |
溶液A | 13ml |
溶液B | 13ml |
溶液C | 18ml |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50ml |
DNA洗脱液 | 10ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,短期可以在室温放置;长期保存Z好放4℃。
使用方法:一:培养细胞预处理1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。
2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:组织细胞预处理3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小Z好),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:Z好不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。
三:血液预处理4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。
5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四:mtDNA提取5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。
7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。
9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。
10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。
11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。
13. 重复上步1次。
14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。
16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。
18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。
19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。
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温馨提示:不可用于临床ZL。