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百奥莱博专业生产销*(代"售")BTN91104A型Denhardt溶液(同位素探针)说明书,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:BTN91104A型Denhardt溶液(同位素探针)说明书
编号:BTN91104A
规格:250mL
英文名:Denhardt Solution
品Pai:百奥莱博
产地:北京
本产品是Z经典的、用于核酸膜杂交时降低膜对标记探针的非特异结合的试剂,早在Southern杂交出现前10年由Denhardt发明,该产品可用与Southern(含单拷贝基因)、Northern、非同位素杂交(B型规格),与硝酸纤维素膜、尼龙膜等各种常用的核酸杂交介质兼容。A和B分别适用于同位素和非同位素探针。
储存条件:低温运输、-20℃保存、有效期一年。
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BTN91104A型Denhardt溶液(同位素探针)说明书关键词:Denhardt溶液(同位素探针),BTN91104A,Denhardt Solution
·无缝克隆试剂盒
编号:BTN160680
英文名称:Seamless Cloning and Assembly Kit
规格:25次
无缝克隆是一种简单、快速、GX的DNA 定向克隆技术,该技术突破传统,不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制,利用同源重组的原理,可将任何DNA片段克隆至任何载体的任何位点。反应及转化时间短,阳性率达95%以上。
产品特点:
1. 简单、GX地定向克隆DNA片段。
2.可同时定向克隆两个或多个DNA片段。
3. 不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制。
4. 省时,反应时间加转化时间短至20分钟。
5. PCR产物(仅有目的条带、无非特异条带和引物二聚体)可直接进行重组反应,无需纯化。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
2×Seamless Mix | 125μl |
阳性对照DNA片段I | 10μl |
阳性对照DNA片段II | 10μl |
阳性对照线性化载体 | 10μl |
超纯水 | 1ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:1. 线性化载体的制备:
可通过单酶切、双酶切或PCR扩增的方法来制备。(如果线性化不彻底,将会导致阴性克隆的产生,推荐使用双酶切或PCR扩增的方法。)
2. DNA片段的制备:
1)DNA片段可通过PCR扩增或酶切的方法制备,PCR扩增片段无需纯化即可用于重组反应。
2)PCR扩增法引物设计原则:
A.引物的3´端必须包含18-50个能与模板DNA 结合的碱基序列,以便PCR扩增出目的DNA片段。
B.引物的5´端必须包含15-80个与线性化载体末端同源的碱基序列,以便PCR扩增片段能与线性化载体进行重组反应。
3. 重组反应:
1)按照如下体系操作:
2)50℃反应15分钟,然后将离心管放置于冰上。如当天不进行转化实验,请将连接产物放-20℃保存。
注:线性化载体建议使用20-60 ng,DNA片段按照与线性化载体摩尔比3:1使用。
4.转化:
1)取5μl连接液至50-100μl 刚刚融化的感受态细胞中,轻轻混匀,冰浴2-30分钟。
2)42℃水浴热激30秒。
3)立即放置于冰上静置2分钟。
4)加入300-500μl 无菌SOC或LB培养基(不含抗生素),37℃,200-250rpm 振荡培养60分钟。
5)吸取 200μl菌液涂板,为得到更多克隆,可先3000 g离心2分钟,弃掉部分上清,用移液器轻吹菌体,至充分悬浮,取全部菌液涂板,然后37℃培养过夜(12-16小时)。
5. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。
6. 阳性对照反应(可选)
将本试剂盒提供的阳性对照DNA片段和线性化载体按如下体系操作:
阳性对照DNA片段I(600bp,20 ng/μL)
或阳性对照DNA片段I(900bp,30ng/μL)
1μl |
阳性对照线性化载体(2.8kb,30ng/μL) | 1μl |
2×Seamless Mix | 5μl |
超纯水 | 3μl |
50℃反应15分钟,然后按照步骤4转化涂板后用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定阳性重组子。
BTN91104A型Denhardt溶液(同位素探针)说明书关键词:Denhardt溶液(同位素探针),BTN91104A,Denhardt Solution
·农杆菌GV3101化学感受态细胞
编号:BTN140384
英文名称:E.coli GV3101 Chemical Competent Cell
规格:10×100μL
本产品为GV3101农杆菌化学感受态细胞,其具有利福平和庆大霉素抗性,适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达104cfu/μg。
基因型:C58(rifR)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期一年。
自备试剂:质粒DNA、液氮等
使用方法:转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在 28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2. 无菌条件下,向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒,每100μL感受态细胞加1μg质粒DNA,轻柔混匀。冰水浴中静置10分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻 5分钟(注:也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟,不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基,28-30℃振荡培养2~3小时。使菌体复苏,表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌,保留100μl左右上清,轻轻吹打重悬菌体,均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上,待平板中的液体完全吸收后,倒置平板,28-30℃培养48-72小时。
注:当平板只含有50μg/mL kan时,28℃培养48小时即可;平板中同时加入50μg/mL kan,20μg/mL rif时,需 28℃培养 60h;如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要 28℃培养 72-90小时。
注意事项:1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少用于涂板的菌量。
4. 利福平浓度不应高于25μg/μL,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有 50μg/mL kan,若所用平板含有 20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti质粒丢失,但链霉素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素,Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
6.相关抗生素配方:
抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
羧苄青霉素(carb) | 双蒸水溶解 | 50mg/mL | 50μg/mL |
硫*(代"酸")卡那霉素(kan) | 双蒸水溶解 | 50mg/mL | 50μg/mL |
链霉素(strep) | 双蒸水溶解 | 10mg/mL | 50μg/mL |
利福平(rif) | DMSO溶解 | 10mg/mL | 20μg/mL |
庆大霉素(gent) | 双蒸水溶解 | 20mg/mL | 40μg/mL |
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温馨提示:不可用于临床ZL。