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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")ZN1874型微量BCA蛋白质定量试剂盒价格,我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:ZN1874型微量BCA蛋白质定量试剂盒价格
产地:国产|进口
编号:ZN1874
品Pai:百奥莱博
产品规格:
溶液 A 100ml
溶液 B 100ml
溶液 C 5ml
蛋白标准品 20ml(2mg/ml)
产品保存:室温保存,一年有效。
产品说明:
1.超敏感,检测浓度为0.5 μg/mL。
2.线性范围在 0.5~20 μg/mL,尤其适用于低浓度的样品。
3.对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感,但对 Cu的还原剂和螯合剂敏感。
4.比 Lowry 法更加简单快捷。
5.试剂稳定,室温可以放置一年。
6.终产物稳定,检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7.Z短可以检测双肽,适合于分子量较小的蛋白质。
8.有常规(普通试管)和微量(96 孔板)两种检测模式。
标准品以及工作液的制备:
A.牛血清白蛋白标准品稀释液的制备
注意:上表适用于微孔板法的标准品稀释,试管法的标准品稀释可按照具体使用量进行比例扩大。
B.微量BCA工作液的制备
1.使用下列公式计算出所需工作液的总体积:
(标准孔数 +待测样品孔数)×(重复数)×(每个样品孔的工作液体积)= 所需工作液的总体积
例如:标准的试管测定每个样品需要3个不同的稀释度和2次重复(8个标准孔 + 3个待测样品孔)×(2重复)×(1 ml)= 22 ml BCA工作液(可以多配到25 ml)。
注意:在试管检测法中,每个样品需要1ml的工作液,在微孔板检测中,每个样品需要150μl的工作液。
2.配制 BCA 工作液:
先将溶液 A、溶液 B和溶液 C 按 50:48:2的比例混合,所得溶液即 BCA 工作液。
比如:5 ml 溶液 A + 4.8 mL 溶液 B +200μl 溶液 C。
注意:试剂C刚加入到试剂A和试剂B中时,会产生浑浊并迅速消失呈清绿色溶液。制备足够体积的工作液以检测相应数量的样品。
使用方法:
一:微孔板测定法
1.吸取150μl的标准品及未知样品分别至微孔板中。
2.滴加150μl的工作液到每孔中并充分混合30秒。
3.盖上微孔板并在37°C孵育2小时或60℃放置 1 小时。
4.微孔板冷却至室温。
5.10分钟内在酶标仪上测量562nm时的吸光值。注意:冷却至室温后依然会继续显色。但是,在室温时的显色比例已经很低,在10分钟内检测到的吸收值一般都不会有太大影响。
6.绘制标准曲线,测量样品的浓度。
二:试管测定法
1.吸取1.0ml的标准品及未知样品分别至对应标记的检测管中。
2.滴加1.0ml的工作液至每管中并充分混合。
3.盖上检测管并于60°C水浴孵育1个小时。
4.所有试管冷却至室温。
5.10分钟内在分光光度计上测量562nm时的吸光值。注意:冷却至室温后依然会继续显色。
但是,在室温时的显色比例已经很低,在10分钟内检测到的吸收值一般都不会有太大影响。
6.绘制标准曲线,测量样品的浓度。
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3671-99-6 葡萄糖-6-磷酸二* D-Glucose6-phosphate
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ZN1874型微量BCA蛋白质定量试剂盒价格关键词:百奥莱博,ZN1874,微量BCA蛋白质定量试剂盒
·Death Receptor 3 mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN0389
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:hμman,rat,mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.Death Receptor 3 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:Z重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
Death的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
ZN1874型微量BCA蛋白质定量试剂盒价格关键词:百奥莱博,ZN1874,微量BCA蛋白质定量试剂盒
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9001-12-1 CollagenaseⅡ 胶原酶Ⅱ
免疫染色固定液 100ml
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ARB11386 人活化蛋白C(APC)Elisa分析 Human activated protein c,apc ELISA KIT
BTN100807 杜氏PBS溶液,10× Dulbecco PBS Buffer,10×
ARB10620 人血栓素A2(TX-A2)酶联免疫定量检测 Human thromboxane a2,tx-a2 ELISA KIT
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温馨提示:不可用于临床ZL。