抗体芯片实验外包服务

【嘉美实验】嘉美实验提供抗体芯片实验服务，您只需提供保存完好的标本（组织、细胞或血清等），嘉美实验的芯片技术服务人员就可替您完成实验操作与数据分析，向您提供由您所选的任何一种芯片的实验结果，可以为您节省大量的时间与精力。
 
蛋白质表达谱芯片实验内容
1、样品蛋白质抽提
a. 实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品置于冰上，加1ml含蛋白酶YZ剂的总蛋白抽提试剂，匀浆后，离心，取上清，立即使用或储存到-80℃。 
b. 实验对象为细胞样品，离心收集细胞，每份样品取1×106～1×107细胞，预冷的PBS清洗细胞两次，去PBS加1ml含蛋白酶YZ剂的总蛋白抽提试剂，匀浆，离心，取上清，即得总蛋白抽提物，立即使用或储存到-80℃。 
c. 实验对象为血清或细胞培养液，离心，取上清，立即使用或储存到-80℃。
2、蛋白质定量
按KCTMBCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品蛋白浓度，以校正过的BSA标准蛋白562nm(540-590nm均可以)测量值对其浓度（µg / ml）做图绘制标准曲线，使用标准曲线定量待测样品蛋白浓度，以确定实验所需的样品量。
3、蛋白标记
荧光标记蛋白样品并纯化荧光标记的蛋白样品
4、荧光标记的蛋白样品与芯片杂交
5、图象扫描，分析
使用Genepix 4000B进行图像扫描，使用532nm或635nm(根据荧光基团选择相应的波长)激发，测定实验样品各点的信号强度。图像存成TIF文件，利用软件Genepix Pro 6.0分析数据，分析结果导出，用EXCEL文件表示。
6、提供实验报告
提供详细的实验报告，包括实验步骤、检测数据和相关图表等。
 
蛋白质磷酸化芯片实验内容
1、样品蛋白质抽提
a. 实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品置于冰上， 加1ml含蛋白酶YZ剂的总蛋白抽提试剂，匀浆后，离心，取上清，立即使用或储存到-80℃。
b. 实验对象为细胞样品，离心收集细胞，每份样品取1×106～1×107细胞，预冷的PBS清洗细胞两次，去PBS加1ml含蛋白酶YZ剂的总蛋白抽提试剂，匀浆，离心，取上清，即得总蛋白抽提物，立即使用或储存到-80℃。
c.实验对象为血清或细胞培养液，离心，取上清，立即使用或储存到-80℃。
2、蛋白质定量
按KCTMBCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品蛋白浓度，以校正过的BSA标准蛋白562nm(540-590nm均可以)测量值对其浓度（µg / ml）做图绘制标准曲线，使用标准曲线定量待测样品蛋白浓度，以确定实验所需的样品量。
3、芯片封闭
将芯片与封闭缓冲液在室温条件下孵育30分钟，封闭大多数非特异性结合位点。
4、蛋白样品与芯片杂交
封闭后的芯片经过短暂干燥，搁到一个潮湿的杂交室中，蛋白样品（30μl），并加入30μl杂交缓冲液，上样，在一定温度下孵育杂交。
5、生物素标记磷酸化抗体孵育
根据选择，利用生物素偶联的抗磷酸化酪氨酸（或是丝氨酸、苏氨酸）的抗体与芯片孵育，使抗体结合到相应的位点。
6、荧光标记链亲和素孵育
将荧光标记的链亲和素在一定条件下与芯片孵育，使之与生物素结合。
7、芯片洗涤和干燥
去除盖玻片，用洗涤缓冲液洗涤4次，然后用去离子水洗涤，然后吹干或者离心甩干。
8、图象扫描，分析
使用Genepix 4000B进行图像扫描，使用532nm或635nm(根据荧光基团选择)激发，测定实验样品各点的信号强度。图像存成TIF文件，利用软件Genepix Pro 6.0分析数据，分析结果导出，用EXCEL文件表示。
9、提供实验报告
提供详细的实验报告，包括实验步骤、检测数据和相关图表等。
 
蛋白质相互作用芯片实验内容
1、样品蛋白质抽提
a. 实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品置于冰上，加1ml含蛋白酶YZ剂的总蛋白抽提试剂，匀浆后，离心，取上清，立即使用或储存到-80℃。
b. 实验对象为细胞样品，离心收集细胞，每份样品取1×106～1×107细胞，预冷的PBS清洗细胞两次，去PBS加1ml含蛋白酶YZ剂的总蛋白抽提试剂，匀浆，离心，取上清，即得总蛋白抽提物，立即使用或储存到-80℃。
c. 实验对象为血清或细胞培养液，离心，取上清，立即使用或储存到-80℃。
2、蛋白质定量
按KCTMBCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品蛋白浓度，以校正过的BSA标准蛋白562nm(540-590nm均可以)测量值对其浓度（µg / ml）做图绘制标准曲线，使用标准曲线定量待测样品蛋白浓度，以确定实验所需的样品量。
3、芯片封闭
将芯片与封闭缓冲液在室温条件下孵育30分钟，封闭大多数非特异性结合位点。
4、蛋白样品与芯片杂交
封闭后的芯片经过短暂干燥，搁到一个潮湿的杂交室中，蛋白样品（30μl），并加入30μl杂交缓冲液，上样，在一定温度下孵育杂交。
5、一抗孵育
利用靶蛋白相对应的一抗在适当条件下与芯片孵育适当时间，使抗体结合到相应的位点。
6、二抗孵育
利用荧光染料偶联的二抗与芯片孵育，使抗体与靶蛋白的一抗结合。
7、芯片洗涤和干燥
去除盖玻片，用洗涤缓冲液洗涤4次，然后用去离子水洗涤，然后吹干或者离心甩干。
8、图象扫描，分析
使用Genepix 4000B进行图像扫描，使用532nm或635nm(根据荧光基团选择相应的波长)激发，测定实验样品各点的信号强度。图像存成TIF文件，利用软件Genepix Pro 6.0分析数据，分析结果导出，用EXCEL文件表示。
9、提供实验报告
提供详细的实验报告，包括实验步骤、检测数据和相关图表等。

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