北京现货cDNA链合成试剂盒(去除基因组DNA)哪里买

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京现货cDNA链合成试剂盒(去除基因组DNA)哪里买在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京现货cDNA链合成试剂盒(去除基因组DNA)哪里买
品Pai：百奥莱博
规格：100次
英文名：BalbScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit
产地：国产|进口
  本试剂盒是用于去除基因组DNA进行反转录的试剂盒。该试剂盒在42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有YZgDNA Eraser的组分，经过 gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行逆转录反应合成cDNA。本试剂盒配有新型GX反转录酶BalbScript，新颖突变位点大幅提升酶的转录活性，cDNA链合成的效率和产量更高，可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA链。如逆转录产物cDNA用于下游荧光定量检测，可在42℃，15min完成逆转录反应。本试剂盒适用于链cDNA的合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR、以及全长cDNA文库的构建等。

试剂盒组成：

 

组份	25次	100次
gDNA Eraser	12.5μl	50μl
10×gDNA Eraser Buffer	30μl	120μl
BalbScript，200 U/μl	25μl	100μl
5×ScriptRT Buffer	120μl	500μl
Primer Mix	30μl	120μl
RNase-Free Water	1ml	2×1ml

产品特点
1、快速去除基因组：含有去除基因组DNA 的gDNA Eraser，只需2min即可除去基因组DNA。
2、快速逆转录：15分钟即可获得荧光定量PCR模板cDNA链合成。
3、灵敏度高：可利用pg级总RNA或mRNA模板合成cDNA链。
4、GX的逆转录效率：新颖突变位点大幅提升酶活性能，获得更高产量的cDNA。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。
2、逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于-20 ºC保存，并尽量避免反复冻融。
3、反应体系可倍比放大，10μl反应体系可使用1μg总RNA。
4、Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成， 也可根据实验需要选用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。
5、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶YZ剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号为WE0223。
6、对于二级结构复杂的RNA模板，建议在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分钟立刻置于冰上，短暂离心后进行下一步操作。

操作步骤：
将模板RNA在冰上解冻；试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。

一、去除基因组DNA反应
1、根据以下表格在冰上配制反应体系，总体积为10μl。为了保证反应液配制的准确性，先按反应数+2的量配制预混体系，然后再分装到每个反应管中，加入RNA样品。

试剂	10μl反应体系
10×gDNA Eraser Buffer	1μl
gDNA Eraser	0.5μl
RNA Template	10 pg-1μg
RNase-Free Water	up to 10μl

注意：如果总RNA量大于1μg，请按比例扩大反应体系。若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶YZ剂(RNasin)，该产品货号为WE0223。

2、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3、42℃孵育2分钟(室温反应时，可以延长到30分钟)。
4、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。

二、逆转录反应

1、根据以下表格在冰上配制反应体系，反应液配制请在冰上进行。为了保证反应液配置的准确性，先按数+2的量配制成预混溶液，然后再分装 10μl到每个反应管中，取配制的预混液10μl加入至已完成去基因组的步骤1反应管中。
 

试剂	20μl反应体系
步骤1反应液	10μl
BalbScript，200 U/μl	1μl
Primer Mix	1μl
5×ScriptRT Buffer	4μl
RNase-Free Water	4μl

注意：可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建议20μl 反应体系Oligo-dT Primer 50pmol，或Gene Specific Primer 2 pmol。

2、混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3、cDNA合成反应条件：
1)若下游进行荧光定量PCR检测，42℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测，42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。
4、反应结束后，短暂离心后置于冰上，再进行后续PCR或荧光定量PCR，如果需要长时间保存，请置于-20℃。
注意：进行Real-time PCR反应时，逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

更多有关北京现货cDNA链合成试剂盒(去除基因组DNA)哪里买的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·哺乳动物蛋白抽提试剂盒
编号：WE0262
英文名称：Mammalian Protein Extraction Kit
规格：25次|100次
  本试剂盒能够快速，温和，GX的裂解哺乳动物细胞，有效提取细胞浆和细胞核蛋白。该试剂使用温和配方保证所提取蛋白保持生物学活性并可应用于多种蛋白分析试验，如：报告基因和酶活性测定，免疫检测，蛋白纯化等。提取后蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析。哺乳动物蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶YZ剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。

试剂盒组成：

组份	25次	100次
Mammalian Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品可有效裂解细胞培养板培养的贴壁细胞(无需刮取)以及离心收集的悬浮细胞，较反复冻融或超声法具有更高提取效率。但对于组织蛋白的抽提，建议使用组织蛋白抽提试剂盒(WE0260)。
2、表1中所列的是贴壁细胞蛋白提取的使用量，先收集细胞可以减少试剂用量从而获得更高的蛋白浓度。
3、也可以根据细胞数量估计抽提试剂的使用量。如2×106个Hela细胞约重20 mg，需要加入200μl抽提试剂。
4、通过本产品提取的蛋白，可通过BCA法进行蛋白定量分析。

使用方法：

贴壁细胞蛋白抽提
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、小心倾去贴壁细胞的培养液，使用PBS漂洗细胞。
3、加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent(抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，在冰上用枪头吹打贴壁细胞，将裂解液转移至离心管中，冰上孵育20分钟，让细胞充分裂解(试剂使用量请参考附表1，冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
4、14000×g离心5-10分钟。
5、转移上清液至新管中，用于进一步分析。

悬浮细胞蛋白提取
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、将悬浮细胞2,500×g，离心10分钟，弃去上清。使用PBS漂洗细胞。2,500×g，离心10分钟，弃去上清。
3、加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent，抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。
4、每100 mg细胞加入至少1ml 1×工作液。如提取的样本量较大，可首先使用少量1×工作液重悬细胞，然后加入剩余工作液。
5、吹打均匀后，冰上放置20分钟，让细胞充分裂解(冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
6、14000×g离心15分钟。
7、转移上清至新管中，进行下一步分析。

附表1. 抽提试剂使用量推荐表

细胞培养板类型或平皿类型	抽提试剂使用量
100mm	500-1000μl
60mm	250-500μl
6孔培养板	200-400μl/孔
24孔培养板	100-200μl/孔
96孔培养板	50-100μl/孔

附表2. 常见问题及解决办法

问题	可能原因	解决方法
低提取率	低蛋白表达量	优化转染系统
	试剂使用量不够	增加抽提试剂使用量
	试剂无法溶解细胞膜	增加裂解时间或者加大晃动幅度
无法获得膜蛋白	更适合提取核浆蛋白	使用真核细胞膜蛋白抽提试剂盒

储存条件：-20℃


北京现货cDNA链合成试剂盒(去除基因组DNA)哪里买关键词：cDNA链合成试剂盒,WE0133,BalbScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit,cDNA链合成试剂盒(去除基因组DNA)


·罗丹明标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
编号：WE0378
英文名称：Goat Anti-Mouse IgG, TRITC Conjugated
规格：100μl
本产品为TRITC标记的经抗原亲和纯化的山羊抗体，特异识别小鼠IgG重链和轻链。使用本产品检测灵敏度高，本底低，稳定性好。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学的研究。TRITC(四甲基异硫*酸罗丹明)为罗丹明的衍生物，激发后呈现明亮的橙红色荧光。与FITC的黄绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。

免疫原：小鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：TRITC，Amax=550; Emax=570
应用范围：对于大多数实验(1：25-100)

·Bradford蛋白定量试剂盒
编号：WE0275
英文名称：Ultra Bradford Protein Assay Kit
规格：800次微孔板(100管次)
  Bradford 法是Z简单和快速的比色蛋白定量方法。 这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后， 产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595 nm处有的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595 nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的Bradford方法进行了改良，限度的加大蛋白定量的线性范围，变异性小于普通考马斯亮蓝染色法，灵敏度范围为100-1,500μg/ml。使用本产品反应迅速，颜色产物1小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统，不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。

试剂盒组成：

组成	规格
Bradford Protein Assay Reagent	2×100ml
BSA Standard Solution(2mg/ml)	2ml

注意事项：
1、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
2、本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量，具体干扰物质(具体见附表1)，可采用BCA蛋白定量试剂盒(WE0276)或其他蛋白定量产品。
3、所测蛋白分子量必须大于3 kD。

使用方法：
1、稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
 

管号	稀释液用量(μl)	BSA标准品用量(μl)	BSA标准品浓度(μg/ml)
A	0	100	2000
B	50	150	1500
C	200	200	1000
D	200	200(从C管中取)	500
E	200	200(从D管中取)	250
F	200	200(从E管中取)	125
G	200	0	0(空白)

2、试管检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)按上表稀释标准品，将30μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
2)取干净的试管，分别加入30μl待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个测定做2-3个平行反应。
3)向步骤1)和步骤2)的试管中各加入1.5ml Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，室温放置10分钟。
4)用分光光度计测定595 nm处的吸光值。
5)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
6)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

3、微孔检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。
2)每孔加入250μl Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10分钟。
3)用酶标仪测定595 nm处的吸光值。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

附表1. 干扰物质表

化合物	耐受浓度
缓冲液
乙酸盐	0.6M
甘*酸	0.1M
HEPES	0.1M
MES	0.7M
MOPS	0.2M
Na+-柠檬酸	50mM
PIPES	500mM
磷酸*/磷酸*	1M
乙酸*	0.6M
Tris	2M
盐类
硫*(代"酸")铵	1M
NaCl	1M
尿素	6M
极性化合物
甘油	99%
还原剂
β-巯基乙醇	1M
DTT	1M
去垢剂和变性剂
Brij35	干扰
脱氧胆酸纳	0.25%
CHAPS	1%
NP-40	干扰
辛葡糖	2%
SDS	0.1%
Tween-20	干扰
Triton X-100	0.1%
糖类
蔗糖	1mM
螯合剂
EDTA	100mM
EGTA	50mM
其他
HCl	0.1M
NaOH	0.1M
NAD	1mM
*	5%

储存条件：2～8℃


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50-29-3 Chlormequat chloride 矮壮素
N-甲基-D-葡糖胺 MBTH Hydrochloride 6284-40-8
ARB14129 植物油菜素内酯(BR)酶联免疫定量检测 
BTN130827 小RNA克隆试剂盒 Small RNA Cloning Kit
β-谷甾醇 Protein protectant DP7 83-46-5
BL1122 柠檬酸*抗原修复液(1×)
尿素(Urea)检测试剂盒(二乙酰一肟微板法)   100T
50-28-2 β-Estradiol β-雌二醇
ARB10616 人血纤肽/纤维蛋白肽B(FPB)含量测试 Human fibrinoPeptide b,fpb ELISA KIT
精子稀释液(含Trypan Blue,计数液)   100ml
F050315 鸡IgY抗体 Chicken IgY
ARB11287 人*结合蛋白(CR)酶标法分析 Human calretinin,cr ELISA KIT
七叶苷 N-Acetyl-L-Glutamic acid 66778-17-4

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