北京一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)厂家在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：北京一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)厂家
产地：国产|进口
规格：100次
编号：WE0139
品Pai：百奥莱博
英文名：SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit(High ROX)
  本试剂盒是一步法Real-Time RT-qPCR专用试剂盒。所含的SYBR Green I荧光染料可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。全新GX逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解。该酶逆转录效率高，可对少量 RNA模板进行良好的逆转录反应。与RNA亲合性高，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。全新GX热启动酶，在常温下酶的活性被封闭，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥功效，提GX率。本产品灵敏度高，特异性高，线性范围广，对目的基因定量更准确。

ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。

不需要ROX校正的仪器:(WE0137)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0138)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0139)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0137-100次	WE0138-100次	WE0139-100次
2×SuperSYBR One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
SuperSYBR One Step EnzymeMix	50μl	50μl	50μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中的各试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、SuperSYBR One Step RT-qPCR Buffer中含有SYBR Green I 荧光染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4、本试剂盒中的各试剂应避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
5、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-PCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
6、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

操作步骤：
1、将RNA模板、引物、2×SuperSYBR One Step Buffer、SuperSYBR One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
SuperSYBR One Step EnzymeMix	0.5μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(optional)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-0.5μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为两步法)，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为例。
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	5 min
变性	95℃	10 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为参照设定。

RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为三步法)：
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10min
PCR预变性	95℃	5min
变性	95℃	15s	30-40 个循环
退火	56℃-64℃	30s
延伸	72℃	30s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1min
	95℃	15s
	60℃	15s

注意：
1)三步法PCR扩增时，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

更多有关北京一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)厂家的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·FITC标记驴抗小鼠IgG(H+L)
编号：WE0360
英文名称：Donkey Anti-Mouse IgG, FITC Conjugated
规格：100μl
本产品为FITC(硫*酸荧光素)标记的经亲和纯化的驴抗体，特异识别小鼠IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学、细胞化学、流式细胞分析等研究，在临床检验上也用于细菌、病毒和寄生虫的检验及自身免疫病的诊断等。

免疫原：小鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：对于大多数实验(1：50-200)

·Protein G琼脂糖凝胶
编号：WE0270
英文名称：Protein G-Sepharose
规格：5ml
  本产品为Protein G与Sepharose偶联后产物，可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。Protein G是链球菌(group C和G)细胞表面蛋白。它不Protein A类似，通过不免疫球蛋白的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。但两者结合特异性有所丌同。Protein G对人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a等具有高亲和力。天然Protein G具有白蛋白和细胞表面结合域。重组Protein G去除了白蛋白和细胞表面结合域，以减少非特异性结合。本产品具有广谱 IgG结合、高Fc段结合活性、高抗体吸附量和性能稳定等特点，可重复多次使用。

注意事项：
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml，以免上样浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性，以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右)，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸*缓冲液(pH3.0)做再生处理，长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。

使用方法：

I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液：20 mM PBS，150 mM NaCl，pH7.4-8.5。
2、洗脱缓冲液：0.1 M Glycine，pH2.5-3.0。
3、再生缓冲液：1 M NaCl。
4、中和缓冲液：1 M Tris-Cl，pH9.0。
注意：
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。

II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰，去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意：样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。

III 操作步骤
1、将Protein G-Sepharose填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净，用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱，上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积，直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。
注意：操作中如果没有实时的蛋白监测系统，收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中，根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积，再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积，再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。

储存条件：2～8℃，避免冷冻


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·防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)
编号：WE0126
英文名称：Multiplex PCR MasterMix(UNG)
规格：1ml
  本品是由BaldStar Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs(含dUTP)、UNG酶以及PCR稳定剂等组成的PCR预混体系。使用本产品无需进行繁杂的PCR反应条件的优化过程，只需进行简单的条件摸 索即可轻松进行多重PCR反应。
  本产品所含的BaldStar Taq DNA Polymerase是经化学修饰的热启动酶，可以有效 减少PCR反应初期因引物错配而产生的非特异扩增。独特的缓冲体系，使多重PCR反 应所有的引物都能有效延伸，无需额外优化。此MasterMix中还包含GC Enhancer，有 助于实现“困难”模板(比如，高GC含量的模板)的GX扩增。本产品运用dUTP-UNG 防污染系统，可有效去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导 致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU 碱基PCR产物的形成。
  本品可有效防止PCR产物的残留污染，适用于防污 染多重PCR反应，比如微卫星分析、基因分型和SNP检测等。



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BTN120511 CpG 甲基转移酶(M.SssI) CpG Methyltransferase(M.SssI)
PY02-134  马铃薯葡萄糖蛋白胨肉汤  250克  
002012 枸橼酸纳抗凝兔血
DL-谷*酰胺 1,4-Dihydroxyanthraquinone 6899-04-3
3-硝基*(代"*")甲*(代"酸") Acetyl CoA 121-92-6
二甲胺盐*(代"酸")盐 Fuchsin acid 506-59-2
ARB11159 人周期素依赖性激酶7(CDK-7)检测服务 Human cyclin-dependent kinase 7,cdk-7 ELISA KIT
D0601 脱纤维兔血(无菌 pet瓶装) 100ml
异香兰酸 MOPSO 645-08-9
1476-53-5 Novobiocin Sodium Salt 新生霉素
脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法)   50T|100T
F050309 小鼠IgG2b抗体 Mouse IgG2b
ARB11516 人胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)Elisa方法检测 Human thymus activation regulated chemokine,tarc ELISA KIT
PY04-045  复达欣/头孢他啶  0.8mg/支×10支  每支添加于100mlPALCAM培养基基础中，用于李斯特氏菌的选择性分离培养
NF-218 抗C反应蛋白(CRP)血清
乳酸* Potassium sulfite 814-80-2
BOC-O-苄基-L-酪*酸 CIP 2130-96-3
J0315 山羊抗人IgG(H+L)抗血清 1ml/10ml
BL1220 中性红染色液(0.5% 细胞或组织切片染色)

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