印迹膜抗体稀释液优惠促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")印迹膜抗体稀释液优惠促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：印迹膜抗体稀释液优惠促销
英文名：Antibody Dilution Buffer
规格：250mL
编号：BTN81208
产地：国产|进口
本产品用于稀释Western Blot抗体，即开即用，方便快捷。

产品组成：

 

成分	规格
抗体稀释液成分一	100ml
抗体稀释液成分二	0.5g
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、转膜(湿法电转移，本产品不含相关试剂)
1．制备湿法电转液：将湿法电转液干粉全部溶解在1L去离子水中得20×湿法电转液，用时用去离子水稀释20倍预冷待用。
2．根据PAGE胶的大小剪切同样大小的滤纸和各边都大1mm的硝酸纤维素膜(以下简称膜)。避免手直接接触膜。
3．将切好的膜浸泡在新鲜稀释的1×湿法电转液(下简称转移液)中15-20分钟。
 注意：Z好用镊子夹住膜的一边轻轻置于转移液上，只让膜下层不转移液接触，通过毛细管作用使整个膜浸湿。避免让膜沉入转移液中，否则膜不转移液之间形成的气泡会阻止膜的湿润。
4．在容器中将两块海绵垫、六层滤纸用转移液浸湿。
5．在转移夹上依次放上一张浸湿的海绵垫、三层浸湿的滤纸、一块PAGE胶(只要分离胶部分)、一张浸湿的膜、三层浸湿的滤纸、一张浸湿的海绵垫。
 注意：每叠加层一定要用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。膜两边的滤纸不能相互接触，否则电转移时会发生短路，烧坏装置。
6．合起转移夹幵放入转移槽中(一定要注意方向，转印带负电荷的蛋白质时电极方向是膜正胶负；转印带正电荷的蛋白质时，电极方向是膜负胶正)，然后用预冷的转移液灌满转移槽。
7．插上电极，一般在冷却条件下用100V恒压转移30-60分钟或冷室中14V转移过夜。
 注意：一定要检查电流的大小，电流一般在0.1-0.4A。应根据蛋白分子量的大小确定转膜时间，对于小分子量的蛋白，转膜时Z好垫2张或更多张膜(Z多可10 张)，即使白质已经转过了张膜，还会在其它膜上检测到；对于大分子量的蛋白，转膜时电压要高一点，时间也要延长一点，开始Z好也用两块或多张膜。转移时间长的时候特别要注意加强降温措施。如果目的蛋白转移效率低，可以在转移液中加终浓度为20%的甲醇或0.1%的SDS。
8．终止转移后，取出膜，幵在膜上剪去一个小角以标记方向。如有必要可用自备的各种染液对胶或膜进行染色以确定蛋白质转移效率。

二、封膜(本产品不含相关试剂)
1．将膜转移至杂交袋中，加5-10mL Western封膜液后热密封杂交袋开口。
2．室温下用脱色摇床摇动杂交袋30-60分钟。

三、与一抗二抗结合
1．用5mL Western抗体稀释液(配制方法：将抗体稀释液成分二干粉到入成分一溶液中，溶解后即可。未用完的抗体稀释液需-20℃保存)将自备的一抗稀释至适当的倍数(一般需要稀释10-100000倍使用，稀释倍数跟一抗效价相关，需摸索)。
2．剪开杂交袋的一角，倒去封膜液，加入5mL新鲜稀释的一抗溶液，加热密封杂交袋开口。
3．室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟。
4．用抗体稀释液将自备的HRP或AP标记的二抗稀释至适当浓度(一般需要稀释500-4000倍。稀释倍数跟二抗效价相关，需摸索)。
5．剪开杂交袋的一角，倒去一抗溶液(可留存)，加入5mL新鲜稀释的二抗溶液，加热密封杂交袋开口。
6．室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟，也可过夜孵育。
7．剪开杂交袋的一角，倒去二抗溶液(可留存)。
8．剪开杂交袋，用镊子取出膜，用Western洗膜液在器皿中洗3次，每次10分钟。
9．根据二抗的标记酶选择下面两种显色方法之一。

四、HRP显色检测(对HRP标记的二抗，本产品A型，本产品不含相关试剂)
1．将膜平放，在吸附了抗原抗体的一面加入100-500μL TMB溶液A和100-500μL TMB溶液B，铺满整个膜表面(具体用量可按膜的大小增减)。
2．置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分钟，直至深蓝色条带出现。
3．用镊子夹起膜，放入去离子水中洗膜3次终止反应，每次30分钟。
4．空气中晾干后照相保存。
 注意：膜显色后的颜色在数小时后将会褪色，不能存在，故需要及时照相。

五、AP显色检测(对AP标记的二抗，本产品B型，本产品不含相关试剂)
1．用新鲜配制的1×AP缓冲液洗涤硝酸纤维素膜5分钟。
2．将膜转移到新配制的BCIP-NBT法AP显色液中，每cm2膜需要0.1mL显色液。新鲜配制BCIP-NBT法AP显色液(以10mL为例)的方法：将9mL去离子水、1mL 10×AP缓冲液、50μl BCIP溶液和50μl NBT溶液混匀。此溶液必须在1小时内使用。
3．室温摇晃5-30分钟显色(37℃可加速反应)。
4．显色到合适程度后用自备去离子水洗膜3次终止反应，每次30分钟。
5．用吸水纸吸干膜上的水分，避光干燥保存或在一周内照相。

六、Western抗体清除剂(说明：此处理可能会使蛋白质失去某些表位，本产品不含相关试剂)
1．将膜浸泡在Western抗体清除剂中，70℃摇晃孵育30分钟，去除一抗和二抗。用Western洗膜液洗膜两次，每次10分钟。
2．膜即可用于下一次Western检测的膜封堵步骤。

我公司的印迹膜抗体稀释液优惠促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·EDTA溶液
编号：BTN131181
英文名称：EDTA Solution
规格：1mL
本产品是0.2M EDTA溶液，专用于终止各种需要*离子的酶反应。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·自诱导培养基(lac启动子)
编号：BTN100825
英文名称：Auto-induction Medium
规格：200mL
本产品是本产品是在pET 专用生长培养基的基础上开发而成的，它利用E.coli自身对培养基中不同碳源的调控利用机制，实现外源蛋白在细菌达到饱和生长期后的自动诱发。

产品特点：
1．本产品自动诱导表达，不需要添加任何IPTG或相关诱导物，节约成本。
2．免去了密切监控菌液密度的过程，尤其适合大规模筛选。
3．极大将细菌的生长密度OD600从2左右提高20以上。
4．极大提高外源蛋白的表达量，可占细菌总蛋白的45%。
5．与各种细胞培养容器(如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等)兼容。
6．本产品即开即用，非常方便。
7．适用于T7 RNA聚合酶基因由lac启动子控制的任何表达系统，如pET系列。
8．不适用于lacZ或lacY突变的宿主菌。

产品组成：

成分	规格
成分A	200ml
成分B	1.25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

一、培养基的配制
1．配制自诱导培养基：将1.25mL溶液B全部加入到200mL的溶液A中即得自诱导培养基。
 注意：必须严格无菌操作，否则自诱导培养基非常容易长细菌。
2．贴好标签待用。如果长期时间不用，可以冻存在-20℃。

二、培养基的使用
1．将构建好的质粒转化入细菌，如BL21(DE3)，涂于自备的、含有1%葡萄糖的LB培养基中(需要加入适当浓度的KJ素)，37℃培养过夜。
2．挑取单个细菌接种到自备的、含适当浓度KJ素的液体LB培养基中，37℃培养直到菌液浑浊但不饱和(一般需要6-8小时)。
3．将所得菌液按千分之一的体积比例加入自诱导培养基中(如果自诱导培养基体积是100mL，则加入100μl菌液)，同时加入适当的KJ素。注意：在自诱导培养基中，如果使用卡拉霉素，其终浓度比一般的培养基高，需要100μg/mL。由于本方法所得菌液密度大，故需要大量氧气，因此培养基的体积不能超过三角瓶的五分之一。三角瓶底Z好是皱褶式的，这样摇晃中氧气供应更充分。
4．37℃培养过夜，或37℃培养到菌液饱和时降低摇床的温度到所需温度(对温度诱导型启动子)。
5．收集菌液开始蛋白纯化步骤。


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·DNA marker(100-2000bp)
编号：BTN70503R
英文名称：DNA ladder(100-2000bp)
规格：50次
 本系列产品用作凝胶电泳中双链线状DNA的分子量大小参照。它们是由一系列大小不同的单一DNA片段混合组成。成分中已经含有上样缓冲液，所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确，明亮清晰，背景较低，稳定性很好。每次加样量为5μL，可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：直接上样电泳，每次加样量为5μL。

使用效果：

注：750bp条带为20ng/uL,其余每条带为10ng/uL

疑难解答：
a)如对带型要求较高，建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液，电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液，电压为80V)，同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖，同时要经常更换电泳缓冲液。
c)本产品条带均匀，亮度相当，但在EB胶中长时间电泳有可能会出现250bp以下的条带变淡。可以通过先电泳再染色，加大EB浓度等方法解决。


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·大肠杆菌TB1感受态细胞
编号：BTN140645
英文名称：E.coli TB1 Rosetta Competent Cell
规格：10*100μl
 本感受态细胞来源于JM 83，是JM 83 hsdR型，只含有大肠杆菌RNA polymerase，缺少BL21(DE3)菌株的T7 RNA polymerase，适合NEB公司的pMAL 系列质粒原核蛋白表达(The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于pET 系列质粒的表达，具有链霉素抗性。TB1感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。

菌株基因型：F– ara Δ(lac-proAB)rpsL(Strr)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中并静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入700μl 无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
6. 将平板倒置于37℃培养箱中培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
4. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

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