免疫共沉淀试剂盒(Protein A琼脂糖)

特别提示：包括免疫共沉淀试剂盒(Protein A琼脂糖)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：免疫共沉淀试剂盒(Protein A琼脂糖)
英文名称：Immunoprecipitation Kit,Protein A Agarose
产品货号：GS4779
产品规格：20次

储存条件：冷藏（2-8℃）

概述

免疫共沉淀技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法，可以在顺利条件下检测蛋白质间的相互作用。首先以细胞内源性靶蛋白为诱饵，将靶蛋白抗体与细胞总蛋白共孵育，促进免疫复合物的形成；随后加入能够与抗体Fc端结合的ProteinA/G(固化在琼脂糖上），形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-ProteinA/G琼脂糖颗粒”的复合物。该试剂盒通过特殊设计，整个过程是在mini-spin column中进行，而不是在微量离心管中，这样使得抗原-抗体结合珠的洗涤更加方便。

特点
 

• 洗涤中抗原-抗体结合珠损失量Z小；通过提升洗涤步骤的严格性而使非特异信号控制到Z小。

应用

用于检测蛋白间相互作用

组份

10X裂解缓冲液；PMSF;10X IP;SDS(10%);NaCl(5M);Protein A -Agarose;20X PBS;1X loading buffer;Spin columns,tubes,caps

技术规格
 

规格	20 reactions
产品组成	Protein A-琼脂糖（20 reactions）
组成	10X裂解缓冲液（10ml），PMSF（0.6 ml），10X IP(50 ml)，SDS（10%,5 ml)，NaCl（5 M,10 ml)，Protein A-琼脂糖(0.4 ml)，20X PBS(20 ml)，1X上样缓冲液(1 ml)，柱，管，盖(20)
保存	Protein A-琼脂糖需要在4℃保存，PMSF和1X上样缓冲液需要在-20℃保存，其他产品保存在室温即可
保质期	24个月

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货号	名称	规格
BTN61205	血清白蛋白清除剂	15次
SNM409	DTT(1M)	100μl
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名称：SDS-PAGE电泳液(干粉)
货号：BTN81203
规格：5L
本产品为干粉型SDS-PAGE电泳液，加水配制后即可直接用于SDS-PAGE电泳，非常方便。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

名称：SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(4×)
货号：WE0286
规格：200ml
  本产品为配制SDS-PAGE浓缩胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

操作步骤：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，胶浓度请参考附表1。

I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)， 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。

附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与分离范围

SDS-PAGE 分离胶浓度	分离范围
6%胶	50-150 kD
8%胶	30-90 kD
10%胶	20-80 kD
12%胶	12-60 kD
15%胶	10-40 kD

附表2. 配制SDS-PAGE分离胶

分离胶浓度	凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
		纯水	30%Acr-Bis(29:1)	分离胶缓冲液(4×)	10%APS	TEMED
6%	5ml	2.75	1.0	1.25	0.05	0.004
	10ml	5.5	2.0	2.5	0.1	0.008
	15ml	8.25	3.0	3.75	0.15	0.012
	20ml	11	4.0	5	0.2	0.016
8%	5ml	2.42	1.33	1.25	0.05	0.003
	10ml	4.8	2.7	2.5	0.1	0.006
	15ml	7.25	4.0	3.75	0.15	0.009
	20ml	9.7	5.3	5	0.2	0.012
10%	5ml	2.08	1.67	1.25	0.05	0.002
	10ml	4.17	3.33	2.5	0.1	0.004
	15ml	6.25	5.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	8.3	6.7	5	0.2	0.008
12%	5ml	1.75	2.0	1.25	0.05	0.002
	10ml	3.5	4.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	5.25	6.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	7.0	8.0	5	0.2	0.008
15%	5ml	1.25	2.5	1.25	0.05	0.002
	10ml	2.5	5.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	3.75	7.5	3.75	0.15	0.006
	20ml	5	10.0	5	0.2	0.008

附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶

凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
	纯水	30%Acr-Bis(29:1)	浓缩胶缓冲液(4×)	10%APS	TEMED
2ml	1.14	0.34	0.5	0.02	0.002
4ml	2.28	0.68	1	0.04	0.004
6ml	3.42	1.02	1.5	0.06	0.006
8ml	4.56	1.36	2	0.08	0.008

储存条件：2～8℃