免疫共沉淀试剂盒(Protein G琼脂糖)

特别提示：包括免疫共沉淀试剂盒(Protein G琼脂糖)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：免疫共沉淀试剂盒(Protein G琼脂糖)
英文名称：Immunoprecipitation Kit,Protein G Agarose
产品货号：GS4781
产品规格：20次

储存条件：冷藏（2-8℃）

概述

免疫共沉淀技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法，可以在顺利条件下检测蛋白质间的相互作用。首先以细胞内源性靶蛋白为诱饵，将靶蛋白抗体与细胞总蛋白共孵育，促进免疫复合物的形成；随后加入能够与抗体Fc端结合的ProteinA/G(固化在琼脂糖上），形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-ProteinA/G琼脂糖颗粒”的复合物。该试剂盒通过特殊设计，整个过程是在mini-spin column中进行，而不是在微量离心管中，这样使得抗原-抗体结合珠的洗涤更加方便。

特点
 

• 洗涤中抗原-抗体结合珠损失量Z小；
• 通过提升洗涤步骤的严格性而使非特异信号控制到Z小。

应用

用于检测蛋白间相互作用

组份

10X Lysis buffer;PMSF;10X IP;SDS(10%);NaCl(5M);Protein G- Agarose;20X PBS;1X loading buffer;Spin columns,tubes,caps

技术规格
 

规格	20 reactions
产品组成	Protein G-琼脂糖（20 reactions）
组成	10X裂解缓冲液（10ml），PMSF（0.6 ml），10X IP（50 ml），SDS（10%）（5 ml），NaCl（5 M,10ml），Protein G-琼脂糖（0.4 ml），20X PBS(20 ml)，1X上样缓冲液(1 ml)，柱，管，盖(20)
保存	Protein G-琼脂糖需要在4℃保存，PMSF和1X上样缓冲液需要在-20℃保存，其他产品保存在室温即可
保质期	24个月

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核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶YZ剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯合层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。
本试剂盒按每个处理样本50mg细胞/组织计(大约50μl细胞压积)，如果需要处理大量的细胞/组织，将提取液按细胞体积的1:10加入细胞沉淀即可。每个50T试剂盒大约可以提取2.5g细胞/组织样本。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶YZ剂-20℃保存。
【注】
●蛋白酶YZ剂未开盖使用前也可以2-8℃保存。开盖使用后-20℃保存。
●蛋白酶YZ剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或ZL。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品Pai的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．Z好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．将蛋白提取的时间缩短至1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．蛋白提取液：含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。提取液中已含磷酸酶YZ剂混合物。
6．蛋白酶YZ剂YZ了蛋白的降解，蛋白酶YZ剂配方优化。蛋白酶YZ剂混合物包含6种独立的蛋白酶YZ剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64。每一种YZ剂可特异性YZ某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以YZ几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 涡旋混匀器、振荡器 ●冰箱，冰盒
使用注意事项：
1．旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2．实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3．蛋白酶YZ剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4．蛋白酶YZ混合物避免反复冻融。
5．如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶YZ剂混合物不可以一次全部加入提取液。
6．可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶YZ剂单品。

使用方法：
细胞蛋白提取
1．提取液制备：
每200μl蛋白提取液A中加入1μl蛋白酶YZ剂混合物，混匀后置冰上备用。
每200μl蛋白提取液B中加入1μl蛋白酶YZ剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶YZ剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶YZ剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶YZ剂。
●蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整YZ剂混合物是否加入。
2．取5-10×106个细胞，在4℃，1000g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
【注】
● 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
3．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
【注】
●在1000g条件下离心5分钟。
4．每5-10×106中加入400μl冷的提取液A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件下振荡15-30分钟。
【注】
●用振荡器/摇床的较低转速，保持提取液轻微晃动即可。
● 没有振荡条件可以不振荡，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
● 如果部分细胞不能完全裂解，导致核蛋白纯度低，可以延长振荡时间。
5．然后在4℃，1000g条件下离心10分钟。
6．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7．沉淀用PBS洗涤一次，在4℃，1000g条件下离心5分钟，弃上清。
8．在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡5秒。
【注】
● 根据后面和蛋白浓度测定的情况，可调整使用量，一般在50-200μl。
9．置2-8℃条件振荡30分钟，至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
【注】
●用振荡器/摇床的较低转速，保持提取也轻微晃动即可。
● 没有振荡条件可以不振荡，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
10．在4℃，14000g条件下离心10分钟。
11．将上清吸人另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
12．将上述蛋白提取物定量分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
●蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织蛋白提取
1．提取液制备：
每200μl蛋白提取液A中加入1μl蛋白酶YZ剂混合物，混匀后置冰上备用。
每200μl蛋白提取液B中加入1μl蛋白酶YZ剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶YZ剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶YZ剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶YZ剂。
●蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整YZ剂混合物是否加入。
2．取适量组织样本，用手术剪刀尽可能剪碎，加冷PBS，用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
3．在4℃，500g条件下离心5分钟，弃上清。
4．每20-30μl细胞压积(沉淀体积)中加入200μl冷的提取液A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件下振荡20-30分钟。
【注】
●用振荡器/摇床的较低转速，保持提取液轻微晃动即可。
● 没有振荡条件可以不振荡，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
● 如果部分细胞不能完全裂解，导致核蛋白纯度低，可以延长振荡时间。
5．然后在4℃，1000g条件下离心10分钟。
6．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7．沉淀用PBS洗涤一次，在4℃，1000g条件下离心5分钟，弃上清。
8．在沉淀中加入100μl-200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡5秒。
9．置2-8℃条件振荡30分钟，至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
【注】
●用振荡器/摇床的较低转速，保持提取也轻微晃动即可。
● 没有振荡条件可以不振荡，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
10．在4℃，12000g条件下离心10分钟。
11．将上清吸人另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
12．将上述蛋白提取物定量分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
●蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。