耐热型MMLV逆转录酶(无RNase H活性)北京价格

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名称：耐热型MMLV逆转录酶(无RNase H活性)北京价格
产地：国产|进口
编号：BTN131210
品Pai：百奥莱博
本产品为点突变型M-MLV逆转录酶(RNase H缺失)，拥有RNA和DNA聚合酶活性，但由于在RNase H结构域内进行了点突变，该酶缺少RNase H的活性，不会降解DY链CDNA 合成时形成的RNA-DNA 复合物中的RNA，从而可以从长模板中获得高产量的全长cDNA。缺失了RNase H活性的逆转录酶为长cDNA的制备及包含高比例全长cDNA的文库制备提供了更好的选择。

产品特点：
1．温度稳定性，点突变产物的热稳定性可防止与二级结构相关的问题，增强了与模板的亲和力。
2．能够在较宽的温度范围内保持活性，在42-45℃之间具有ZJ活性，在温度高达55℃时仍有活性。
3．聚合酶活性增强，本产品与其它缺失突变得到的M-MLV 逆转录酶相比，具有更高的cDNA产率。
4．高产量制备全长的DY链cDNA，最长可达13kb。合成时可掺入带有修饰的核苷酸(例如 Cy3-、Cy5-、罗丹明-、*基烯丙基-、荧光素-标记的核苷酸)。
5．广泛的工作范围：提高了逆转录的性能，使得可以在更广泛的酶浓度和底物浓度的条件下工作。

产品组成：

 

成分	规格
耐热型MMLV逆转录酶(H-)，200U/μL	50μl
5×RT Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．在无RNase的PCR管中加入如下成分：

成分	用量
▶RNA模板
Total RNA 或poly(A)RNA 或specific RNA	0.1ng-5μg 10pg-500ng 0.01 pg-0.5μg
▶引物
Oligo dT18 或随机引物 或基因特异引物	0.5μg(100pmol) 0.2μg(100 pmol) 15-20 pmol
▶RNase-free水	Up to 12.5μL

2．对富含二级结构的高GC RNA模板，65℃保温5分钟后迅速冰浴2-10分钟。
3．离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。
4．按顺序向上述反应液中加入下表各成分，反应终体积为20μL：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor	0.5μL(20U)
dNTP Mix，10mM each	2μL(终浓度1mM)
耐热型MMLV逆转录酶(H-)	1μL(200U)

 轻柔混匀，短暂离心。
5．42℃保温60分钟(Oligo dT18或基因特异引物)；如果是随机引物则先在25℃保温10分钟，然后再转移至42℃保温60分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板保温温度可以设为55℃。
6．70℃保温10分钟终止反应后置冰上冷却，得到cDNA。该产物可直接用于PCR扩增或-20℃保存。

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