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名称:北京现货限制性内切酶SphI厂家直销
产地:国产|进口
规格:500U
英文名:Sph I Restriction Endonuclease
编号:BTN17-0260
Sph I限制性内切酶识别位点:
5´...G C A T G↓C...3´
3´...C↑G T A C G...5´
产品组成:
成分 | 规格 |
SphI,10U/μL | 50μL |
Buffer A,10× | 1mL |
Buffer B,10× | 1mL |
使用手册 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
贮存Buffer:10mM potassiu*(代"m")-phosphate(pH7.0@25℃),50mM KCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,0.15% Triton X-100,0.5mg/mL BSA and 50% glycerol。
1×Buffer A:10mM Tris-HCl(pH7.5),10mM MgCl2,0.1mg/mL BSA。
1×Buffer B:33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃),10mM magnesium acetate,66mM potassiu*(代"m") acetate,0.1mg/ml BSA。
活性定义:一个活性单位是指50μl反应体系中,37℃条件下,1小时内将1μg的lambda DNA完全分解所需的酶量。
热灭活:65℃下孵育20分钟可灭活。
使用方法:1.单酶切DNA:
①在离心管中加入下列溶液:
成分 | 用量 |
Sph I | 0.5-2μL |
10×Buffer A | 2μL |
DNA(0.5-1μg/μL) | 1μL |
nuclease-free water | 16L |
②轻柔混匀,短暂离心。
③37℃孵育1-16小时。
2.双酶切或多酶切DNA:
需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液(一般Buffer B可作为双酶切Buffer),然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
3.直接酶切PCR产品:
①在离心管中加入下列溶液:
成分 | 用量 |
PCR reaction mixture | 10μL(~0.1-0.5μg of DNA) |
nuclease-free water | 18μL |
10×Buffer A | 2μL |
Sph I | 1-2μL |
②轻柔混匀,短暂离心。
③37℃孵育1-16小时。
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