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即用型PMSF溶液(100mM) 蛋白质研究由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化科研试验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多即用型PMSF溶液(100mM)等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:即用型PMSF溶液(100mM) 蛋白质研究
编号:RFT193
规格:10ml
品Pai:百奥莱博
PMSF是一种不可逆的丝*酸蛋白酶YZ剂,如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶等,作用原理是特异性识别并磺化决定酶活性的丝*酸残基活性位点。此外,其对半胱*酸蛋白酶(如木瓜蛋白酶)和哺乳动物来源的乙酰胆碱酯酶也有YZ效果。PMSF常在细胞或组织裂解之前加入到裂解液中以预防蛋白的降解。PMSF可以单独使用,也常与其他蛋白酶YZ剂如胃抑肽酶A或者磷酸酶YZ剂如正钒酸*混合使用。
本产品配备有PMSF溶解液,可以方便配制成100mMPMSF储备液。由于PMSF不溶于水,有毒性,不稳定的缺点,另有PMSF的无毒替代物,AEBSF(货号:AE1020),活性和功能与PMSF相同,具有毒性低,稳定,溶于水的优点。在蛋白提取中,PMSF推荐使用终浓度为0.1-1 mM,由于PMSF在水系缓冲液中极其不稳定,必须现用现加。
配制使用方法:
取一管PMSF晶体全部加入到PMSF溶解液中,彻底溶解后即配成100mMPMSF溶液。在蛋白提取缓冲液中稀释100倍使用,如500μl提取缓冲液中加入5μl。
注:PMSF溶液在水系缓冲液中极其不稳定,必须现用现加。
储存条件:-20℃,有效期6个月。
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即用型PMSF溶液(100mM) 蛋白质研究关键词:RFT193,100mM,即用型PMSF溶液(100mM),Phenylmethanesulfonyl fluoride
·细菌基因组DNA提取试剂盒
编号:RFT037
英文名称:Bacterial genomic DNA Extraction Kit
规格:50次|100次
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取细菌(革兰氏阳性菌和阴性菌)的基因组DNA。溶菌酶能有效去除细菌细胞壁;蛋白酶K能把核酸解离出来; RNaseA能去除痕量的RNA污染;离心吸附柱能够GX、专一吸附DNA,ZD限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 | 100次 | 贮存方式 |
缓冲液GA | 15 ml | 30 ml | 室温 |
缓冲液GB | 15 ml | 30 ml | 室温 |
去蛋白液GD(浓缩液) | 18 ml | 36ml | 室温 |
漂洗液GW(浓缩液) | 25 ml | 25 ml | 室温 |
洗脱缓冲液EB | 15 ml | 15ml | 室温 |
蛋白酶K(20mg/ml) | 1 ml | 2×1 ml | -20℃ |
溶菌酶(5mg/ml) | 1ml | 2×1 ml | -20℃ |
RNase A(10mg/ml) | 1ml | 1 ml | -20℃ |
吸附柱CG | 50个 | 100个 | 室温 |
收集管(2 ml) | 50个 | 100个 | 室温 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
准备工作:
1、准备55℃和70℃水浴;无水乙醇;1.5ml灭菌离心管。
2、按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液GW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3、每次使用前请检查缓冲液GA,缓冲液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
操作步骤:如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、取细菌培养液1–2 ml,10,000 g离心1分钟,尽量吸净上清;向细菌沉淀中加入180μl EB,旋涡混匀后加入18μl 溶菌酶,室温放置10-15分钟,期间间歇混匀几次。
注:溶菌酶的用量和处理时间与处理的细菌种类密切相关,用户可以根据细菌种类进行调节。如革兰氏阳性菌应将处理时间延长到30-60分钟。
2、10000g离心1分钟,吸弃大部分上清,留下约10μl液体,彻底混匀。
注:由于余留的液体较少,彻底混匀菌体不太容易,用手指弹动管壁附加枪头反复吹打既能完全混匀菌体。混匀一定要彻底,否则容易导致步骤8中离心柱堵塞。
3、向菌体沉淀中加入200μl缓冲液GA,混匀。
4、向管中加入20μl 蛋白酶K,混匀,55℃处理15-30分钟,期间间歇混匀2-3次至溶液清亮。
注:加入蛋白酶K后会产生絮状物,消化彻底的标志是絮状物完全消失,溶液变清亮。如消化不彻底,会导致步骤8中离心柱堵塞。
5、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液,混匀后室温放置2分钟。
6、加入220μl缓冲液GB,混匀,70℃放置10-30分钟(对于革兰氏阳性菌,时间应延长到60分钟)。
注:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置相应时间后溶液会变清亮。如溶液未变清亮,应延长70℃处理时间。如果絮状物不能处理干净,容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
7、加入220μl无水乙醇,充分混匀。
注:加入乙醇后会产生絮状沉淀,可用枪头反复抽打1-2次将沉淀弄碎后再上柱。如果絮状物未做处理,容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
8、将上一步所得溶液和絮状沉淀加入到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中),11000g离心5分钟,倒掉废液,吸附柱CG放入收集管中。
注:如果出现吸附柱堵塞现象,可将离心时间延长到10分钟。
9、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),11,000 g离心2分钟,倒掉废液,吸附柱放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入700μl漂洗液GW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),11,000 g离心60秒,倒掉废液,吸附柱放入收集管中。
11、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液GW,11,000 g离心60秒,倒掉废液。
12、吸附柱CG放回收集管中,11,000 g离心2分钟。
注:此步骤非常重要,其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
13、将吸附柱CG转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,11,000 g离心2分钟。
注意:a.洗脱缓冲液体积不少于50μl,体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。
14、DNA产物-20℃保存。
DNA浓度及纯度检测:
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0%琼脂糖凝胶,使用λ/HindIII判断基因组的大小,完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时, OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水洗脱,比值可能偏低,但并不表明DNA纯度不高。
储存条件:室温,有效期12个月。
即用型PMSF溶液(100mM) 蛋白质研究关键词:RFT193,100mM,即用型PMSF溶液(100mM),Phenylmethanesulfonyl fluoride
·磷酸酶YZ剂混合物(100×)
编号:RFT192
英文名称:Phosphatase inhibitor cocktail
规格:1ml|5×1ml
本品是一种用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物等蛋白提取及其它相关用途的磷酸酶YZ剂混合物(Imidazole,Sodium fluoride, Sodium tartrate dihydrate, Sodium molybdate,β-glycerophosphate and Sodium orthovanadate in H2O),可广泛YZ蛋白提取物中的酸性、碱性、丝*酸/苏*酸和酪*酸磷酸酶。一个包装的本产品通常足够用于100ml的裂解液的配制。
细胞或组织等提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等,容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰,从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等YZ剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。本磷酸酶YZ剂混合物可以有效YZ常见磷酸酶对于蛋白的去磷酸化作用,保持蛋白原有的磷酸化状态。*化*是酸性磷酸酶可逆YZ剂;咪唑是碱性磷酸酶YZ剂;β-甘油磷酸是丝*酸/苏*酸磷酸酶可逆YZ剂;正钒酸*是碱性磷酸酶和酪*酸磷酸酶可逆YZ剂;酒石酸*是酸性磷酸酶YZ剂。
本产品为经优化和测试的用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物蛋白提取的磷酸酶YZ剂混合物,包含了广谱的丝*酸/苏*酸、酪*酸、酸性及碱性磷酸酶YZ剂。
本产品使用便捷,通常以1:100的比例把磷酸酶YZ剂混合物加入裂解液中即可用于样品蛋白的提取,并有效YZ蛋白的去磷酸化。
使用方法:1、使用前常温溶解磷酸酶YZ剂混合物 (100×),混匀,按照1:100 比例加入到组织细胞裂解物中,如1 ml裂解物中加入10μlYZ剂混合物。磷酸酶含量特别丰富的组织,可以适当提高加入量,使其终浓度为2~3×。含有磷酸酶YZ剂混合物的裂解液宜现用现配,不宜配制后冻存待后续使用。根据需要,可以同时考虑添加适当的蛋白酶YZ剂混合物。
2、待所需的YZ剂添加完毕并混匀后,就可以开始进行样品的裂解和蛋白提取。
储存条件:-20℃,有效期12个月。
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购即用型PMSF溶液(100mM) 蛋白质研究。
温馨提示:不可用于临床ZL。