单细胞裂解液(DNA提取)厂家价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")单细胞裂解液(DNA提取)厂家价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：单细胞裂解液(DNA提取)厂家价格
规格：1mL
产地：国产|进口
英文名：Single Cell Lysis Solution
本产品为单细胞DNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效YZ核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定。纯化所得DNA可用于全基因组扩增(WGA)等实验。本产品足够使用200次以上。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

单细胞裂解液(DNA提取)厂家价格极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·单细胞RNA扩增试剂盒
编号：BTN130551
英文名称：Single Cell RNA Amplification Kit
规格：80次
一个哺乳动物单细胞一般只有约10pg的总RNA，其中的mRNA 只有1-5%(约10E5-10E6个分子),因此直接用单细胞进行mRNA扩增具有极大的技术难度。本公司进过精心研究，整合ZX技术，开发出了可以直接用单个细胞进行mRNA扩增的试剂盒，其原理如下(仅以扩增mRNA 链为例)：


产品特点：
1. 双向，既可用于制备正义的mRNA，也可用于制备反义的aRNA(antisense RNA)或cRNA(complimenary RNA)。
2. 直接用单细胞裂解液进行反应，免RNA提取，整个过程只需要半天。
3.适用于多种单细胞，包括卵细胞、干细胞、FACS分离细胞等单细胞，还可用于培养细胞和胚胎等实体租组织(需要单细胞化)，也可以使用10pg-10ng 纯化的总RNA作为模板。
4. 假阴性和假阳性率均小于6%，RNA扩增成功率为90%。
5. 所得mRNA或aRNA(cRNA)可以直接用于后续的RT-PCR、芯片杂交、表达谱分析等实验。
6. 本试剂盒足够对80个单细胞进行单细胞RNA扩增。

成分	规格
P1(cDNA一链合成引物)	360μl
P2(cDNA 二链合成引物)	360μl
P3(T7-cDNA 二链合成引物)	100μl
溶液A(4×细胞裂解液)	100μl
溶液B(RI)	10μl
溶液C(逆转录酶)	40μl
溶液D	10μl
溶液E	10μl
溶液F	150μl
溶液G(TdT)	60μl
超纯水	10μl
PCR 3.0	9ml
转录预配液，2×	500μl
T7 RNA聚合酶	50μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
强烈建议首次使用本产品前，先预实验，用纯化好的任何总RNA 10倍系列稀释，直到浓度为25pg/μL，然后用0.4μL(即10pg RNA，相当于单个细胞的总RNA量)按本操作说明书进行扩增，一次需平行做4-10个重复。
下列步骤仅用于制备mRNA，如果需要制备aRNA(cRNA)，则需要把P1和P2引物对换，其他成分不需要做任何改动。

一：新鲜准备工作液
见手册左侧各表，据此配制的的各工作液足够扩增10个单细胞用。如果一次实验没有10个细胞，工作液的量仍需按10个细胞的用量新鲜配制，冰上放置时间不能超过1小时。

二：准备单细胞悬液
如何制备单个细胞取决于实验样品和所能使用的仪器设备，此处所列步骤仅供分离单个培养细胞的参考，本试剂盒不提供相关试剂。对其他材料(如干细胞克隆、2-8细胞胚胎、胚囊、胚胎组织等)用户需自行选用合适的制备单细胞的方法。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如FACS分离细胞、卵细胞等)，则可以跳过此步直接进入下步操作)：
1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于培养基中并计数。
2.转移100-4000个细胞到离心管中，400g离心4分钟，弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于50μL自备PBS中，使其终浓度为2-80个细胞/μL，所得细胞悬液可直接用于下面的反应。本方法一个管中可以处理1-40个细胞，但这些细胞必须是先分离成独立细胞的，不能是未分离的细胞团。

三：cDNA 合成和PCR扩增
4. 标记10个0.5mL PCR管(10 号设为阴性对照)，按下表加入各成分：

成分	1-10 号样品管
RT工作液(按下表1 配)	每管加4.0μL，共10管
细胞样品(来于第3 步)或10pg-10ng/μL纯化的RNA	1-19号加0.5μL样品(1-40个细胞)，10号用0.5μL水代替
·70℃水浴90秒，转冰上放置1分，短暂离心
溶液C(试剂盒提供)	每管加0.5μL，共10管
·总反应体系为5μL，37℃水浴90m，70℃水浴10m，冰上放置1分钟，短暂离心
Tailing预处理液(按下表2 配)	每管加1μL，共10管
·短暂离心后PCR 仪上37℃ 30m，再80℃ 25m，离心后放冰上1m
Tailing工作液(按下表3配)	每管加6μL，共10管
·短暂离心后37℃15分钟，70℃10分钟，放冰上1分钟
·上步反应管中每个取3μL分别加入2个新PCR管做模板，共分得20个PCR管。每个反应管中剩约6μL，作未PCR对照放-20℃待用。
引物+水混合液(按下表4 配)	每个PCR管加12μL，共20管
PCR Mix 3.0	每管加15μL，共20管
·按(95℃3分，50℃2分，72℃3分)参数循环1次，冰上放1分
P2	每管加1.5μL，共20管
自备PCR级石蜡油	若PCR 仪无热盖，则每管加50μL
·(95℃30秒，67℃1分，72℃3分，每次循环后在72℃的时间增加6秒)循环20次，4℃放置

5. 将模板来于一个样的2 管PCR产物汇集，20 管汇集后将得10 管(对应于10个样)，每管30μL。只有循环数在24次以上时电泳才能检测到PCR产物，故此步不需要电泳检测。
6. 用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，去除残留的引物，50μl 洗脱DNA，产物放-80C 长期保存。
7. 10个样和其对应的未PCR 对照(共20个样)各取0.5μL 为模板进行PCR或定量PCR分析，判断靶基因在哪个样品中得到了扩增和扩增效率如何。没有靶基因的可以选择看家基因。客户需自备相关引物和试剂。

四：制备含T7启动子的模板(下列操作只针对10个样品中的一个)
8. 选一个靶基因得到扩增的DNA样品(第6 步回收所得)，各取1μl 加到10个PCR 管中，各加29μl 新鲜配制的PCR Mix(按下表5 配)，混匀后按以下参数扩增1次(95℃ 5m30s，64℃ 1m，72℃ 5m18s)，再按以下参数扩增8次(95℃ 30秒，67℃ 1m，72℃ 5m18s，每次循环后将72℃延伸时间增加6秒)，PCR结束后在72℃保温10m。
9. 汇集10 管PCR反应液(共300μl)，用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，30μl 洗脱。
10. 将30μL洗脱DNA全部上样到琼脂糖胶上进行电泳(只要电泳10分钟即可，否则胶体积太大，回收效率低)，360nm紫外灯下切胶(250bp以上区域)，ZH用30-50μL 洗脱。此步所得PCR片段无250bp以下的非特异扩增产物，可直接用于后续体外转录。

五：T7 体外转录：请按该试剂盒的使用说明书操作(本产品含体外转录试剂)。

表1:RT工作液

成分	用量
超纯水	30.8μl
溶液A	11μl
溶液B	1.1μl
P1稀	1.1μl
合计	44μl

注：P1 稀是将1μl P1加入到100μL超纯水新鲜配制后得到，需新鲜配制。用户可在此步加入自备的内参，但超纯水的用量要相应减少。如加入2μL内参，则少加2μL 水。

表2:Tailing预处理液

成分	用量
超纯水	8.8μl
溶液D	1.1μl
溶液E	1.1μl
合计	11μl

表3:Tailing工作液

成分	用量
超纯水	42.9μl
溶液F	16.5μl
溶液G	6.6μl
合计	66μl

表4:引物+水混合液

成分	用量
超纯水	231μl
P1	33μl
合计	254μl

表5:PCR Mix

成分	用量
超纯水	132μl
P1	11μl
P3	11μl
PCR 3	165μl
合计	319μl

单细胞裂解液(DNA提取)厂家价格关键词：单细胞裂解液(DNA提取),Single Cell Lysis Solution,BTN130803


·Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)
编号：BTN60704
英文名称：RNase-Free Tris-HCl Solution
规格：250mL

·软骨RNA提取试剂盒
编号：BTN70401
英文名称：Cartilage RNA Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒专门从各种软骨组织样品中快速提取总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。

试剂盒特点：
1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280一般均在1.9以上。
2. RNA产率一般为5-15μg/100mg。
3. 操作简单，整个提取过程一般只需要10多分钟。
4. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 先将50-200mg新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉，加入1mL溶液A(使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解)溶解，然后将研磨物转移到新的1.5mL离心管中，振荡混合30秒。也可以将软骨组织剪碎后与溶液A一起匀浆，再转移到离心管中。
2.在装有研磨物/匀浆物的离心管中加入0.3mL的溶液B，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3. 加入0.2mL自备*仿，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000～15000g离心2-5分钟。
5. 将上清液(约0.8mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。留下100μl上清液不取。
6.在上清液中加入0.5mL的溶液C，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
7. 加入0.2mL的自备*仿，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
8.室温12000～15000g离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
9. 将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
10.在上清液中加入0.5倍体积的溶液D，振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
11.室温12000～15000g离心5-10分钟，RNA将在管底形成白色沉淀(约黄豆大小)。如果组织样品量少或需要提高RNA回收率，也可以延长离心时间到20-30分钟。
12.在离心管中加入1mL 75%的乙醇，振荡器上振荡混匀30秒。
13.室温12000～15000g离心5分钟，RNA将在管底形成细小沉淀(约芝麻大小)。
14. 重复上步75%的乙醇洗涤一次，RNA将在管底形成细小沉淀。
15.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
16. 再短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液。注意：不要吸弃沉淀。此步将有效去除残留的乙醇，否则后续反应会受到影响。
17. 加入适量(一般为20-50μl)RNase-free水使RNA沉淀溶解，存放于-80℃或立即使用。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。
18. 检测

a)RNA完整性的电泳检测
如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以不要使用。
尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，是避免使用。
由于动物细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由28S(约4800nt)，18S(约1900nt)和5.8S(约120nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果这两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则表示RNA有降解(因为大的RNA被酶降解的可能更大)。

b)RNA产量产率测定
将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%。

c)RNA纯度测定
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNA Scavenger和PS Scavenger去除。



单细胞裂解液(DNA提取)厂家价格关键词：单细胞裂解液(DNA提取),Single Cell Lysis Solution,BTN130803

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BL1380 20×SSC PH7.4

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