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名称:北京双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)现货价格
编号:BTN91202
规格:50次
产地:国产|进口
英文名:Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
本产品是经过精心优化的、基于MMLV 逆转录酶和Taq DNA聚合酶的双酶一管式RT-PCR试剂盒,它含有除模版RNA和其专一性引物以外的所有RT-PCR试剂,包括MMLV 逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR缓冲液等,可以在同一反应管内完成RNA→cDNA→PCR反应(RT-PCR反应)。
产品特点:
1.一管式完成RT-PCR反应,避免样品交叉污染。
2. 即开即用,用户不需要单独准备RT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix,将加样步骤减少到ZD,极大降低了加样误差,增加了可重复性。
4. 使用范围广,适用于从病毒RNA 到人RNA的各种RNA 模板。
5.高灵敏度,每个RT-PCR 体系ZD可以检测200拷贝的RNA分子,可扩增的模版RNA的最长达2000nt。
6. 所得RT-PCR产物可以直接用于AT克隆。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
双酶一管式RT-PCR Buffer(2×) | 750μl |
MMLV-Taq Mix | 100μl |
RNase-free水 | 1ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:注意:所有离心管用前全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个30μL 体系的RT-PCR 为例,如果体积不同,各成分用量需要适当调节。
1.在一干净的无RNase的PCR管中,先加入下列成分:
成分 | 阴性对照 | 样品 |
RNA模板(自备,分下面三种情况) | 无 | 见下 |
总RNA | 无 | 100-500ng |
或poly(A)mRNA | 无 | 10-500ng |
或体外转录得到的专一RNA | 无 | 0.01 pg-500ng |
RNA特异性引物一(自备) | 终浓度300nM | 终浓度300nM |
RNA特异性引物二(自备) | 终浓度300nM | 终浓度300nM |
探针(仅对Realtime RT-PCR) | 终浓度200nM | 终浓度200nM |
RNase-free水 | 补到13μL | 补到13μL |
双酶一管式RT-PCR Buffer(2×) | 15μl | 15μl |
MMLV-Taq Mix | 2μl | 2μl |
注:通常初次使用本试剂时,可用引物浓度300nM,探针浓度200nM进行实验,根据实验结果具体情况,在200~800nM 范围内调整引物浓度,在50~400nM 范围内调整探针浓度以达到ZJ检测效果。引物、探针、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整,同时增减DEPC 水用量,保证总反应体积不变即可。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR 仪中进行RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时,一般将RT的条件设定成42℃,30 钟,后接94℃变性5分钟,然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm 值由用户自行决定注)、ZH72℃,5分钟。对Realtime PCR,在复性步骤设置荧光检测,检测通道:FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR结束后取5-10μL电泳检查。
注意事项:1. 使用已校准的移液器,选用一次性PCR反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及配液等操作,所有用具应不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探针设计过程中应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生,探针的位置尽可能靠近上游引物,PCR 目标片段小于200bp,尽可能在150bp以内。
3. 实验样品尽可能新鲜,提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对RT-PCR扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整,选择最适当的引物浓度、样品浓度和PCR扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解,并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差,每次实验应设置阴性对照。
7. 禁止标记PCR反应管,避免外源性荧光信号干扰。
8. PCR反应管中不能有气泡,否则会产生非特异的荧光信号。若有气泡,可先用手指将气泡弹破,然后再低速离心消除。
9. 实时荧光PCR 仪器连续进行实验时,间隔一小时以上再使用。
10. 实时荧光PCR 仪需经常校正和清洁载样板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM荧光PCR 仪,应将毛细管放在专门套管中,以便分装反应体系和加入待检样品。前述操作完毕应低速离心数秒再将毛细管垂直缓慢放入样品架,以免折断;若发生折断,应小心取出,用专用小毛刷擦拭干净后方可进行扩增。
12. 实验室应严格分区,避免PCR产物污染。
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温馨提示:不可用于临床ZL。