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名称:北京现货三日疟原虫/卵形疟原虫核酸双重荧光PCR检测试剂盒哪里卖
规格:48次/盒
等级:科研试剂
编号:SYA138
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
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·肺炎克雷伯菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA037
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·大豆特异性基因Lectin单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA274
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
本试剂盒适用于检测植物中特异性基因Lectin,用于筛查待检测植物中是否含有Lectin基因片段DNA成分。其检测结果仅供参考。
本试剂盒用一对大豆特异性基因Lectin特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用荧光PCR技术进行大豆特异性基因Lectin的检测。
试剂盒组成:
组份 | 数量 | 规格 |
Lectin反应液(Lectin-qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
Lectin阳性对照(Lectin-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
储存条件:-20℃,应避免反复冻融,有效期12个月。
使用方法:一、
样品采集及处理:➤适用标本类型:植物组织及其加工制品。
➤样本采集:称取200g样品。
二、
DNA提取:样品需用粉碎机或冷冻研磨仪研磨至细粉末状。
用户可采用SN/T2584-2010中推荐的方法提取DNA,也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的植物基因组DNA提取试剂盒(过柱法)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议ZH在样品制备区域加入阳性对照。
三、
检测步骤:1.PCR扩增
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Lectin-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
荧光PCR反应液 | 14µL | N×14µL |
酶混合物 | 1 µL | N×1µL |
总量 | 15µL | N×15µL |
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Lectin -PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
2.
qPCR反应条件将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| 1循环 | 50℃ for 2 min |
预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
四、
结果分析:1.
结果分析条件设定直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的ZG点为准。
2.
试验成立判定➤阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(Lectin -PTC):均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
3.
结果判定➤在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明Lectin核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明Lectin核酸阴性。
➤如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行Lectin qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明Lectin核酸阳性;否则判为样本阴性。
五、
注意事项:➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待,按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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温馨提示:不可用于临床ZL。